心肌疾病相关蛋白检验

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1、心肌疾病相关蛋白检验黑龙江省哈尔滨市平房区人民医院(150060)邱鸿血清肌红蛋白(Mb)存在于心肌与其他肌肉组织中，其分子量为17500,血清肌红蛋白是急性心肌梗死(AMI)患者升高的最早、标志物之一。血清肌红蛋白测定方法有很多，由于分光光度法、电泳法及层析法不能测定低于微克水平的Mb,现已不使用。免疫化学法较灵敏，但抗血清必须是对Mb特异的。关键词：心肌疾病蛋白检查一、血清肌红蛋白检验血清肌红蛋白(Mb)存在于心肌与其他肌肉组织中，其分子量为17500,血清肌红蛋白是急性心肌梗死(AMI)患者升高的最早、标志物之一。血清肌红蛋白测定方法有很多，由于分光光度法、电泳法

2、及层析法不能测定低于微克水平的Mb,现已不使用。免疫化学法较灵敏，但抗血清必须是对Mb特异的。放射免疫试验灵敏度高，对流免疫电泳是一种定性方法，且灵敏度较低，不适宜检测心肌梗死。乳胶凝集试验是个半定量试验，是用肉眼判断终点，具有一定的主观性，而且一些含有高浓度类风湿因子的血清会产生干扰。放射免疫试验灵敏度高，特异性强，但使用放射性核素，现己少用。胶乳增强透射比浊法灵敏度高，特异性好，测定速度快，适用于各型生化自动分析仪，现己在临床上普遍釆用。(一)原理Mb致敏胶乳颗粒是大小均一的聚苯丙烯乳胶颗粒悬液，颗粒表面被有兔抗人Mb抗体。样木中的Mb与胶乳颗粒表面的抗体结合后，使

3、相邻的胶乳颗粒彼此交联，发生凝集反应产生浊度。该浊度与样木中的Mb浓度呈正比，在570nm处测定吸光度，可计算样木中Mb的浓度。(二)试剂1.试剂I甘氨酸缓冲液(pH9.0)，NaN31.Og/L。1.试剂致敏胶乳悬液，兔抗人MbIgG致敏胶乳颗粒，NaN3、1.Og/Lo2.Mb校准品。（三）操作1.测定条件温度：37°C。波长：570nm。比色杯光径：1.0cm。反应吋间：5分钟。（四）计算△A=A2-A1釆用非线性多点定标模式，以不同浓度标准品的AA，绘制校正曲线，测定管AA从校正曲线上査出测定结果。（五）参考值1.健康成年人肌红蛋白<70μg/L。2

4、.建议各实验室根据自己的条件，建立本地的参考值。（六）附注1.本法适用于各种类型的半自动、全自动生化分析仪，严格按照仪器说明书设定参数进行操作。2.本法试剂应避光，于2〜8°C可保存12个月，-20可保存更长吋间，但不宜反复冻融。（七）临床意义1.血清肌红蛋白是早期诊断AMI的敏感指标，在AMI发作后1〜2小吋，在患者血清中的浓度即迅速增加。6〜9小吋几乎所有的AMI患者Mb都升高。Mb在血液中清除的速度很快，在发病24小时内可恢复到正常，所以连续检测血清中的Mb，对评价患者在治疗期间是否奋心肌梗死再次发生具奋很重要的意义。患者在发作后第I天内血清肌红蛋白即可返冋到基线

5、浓度，当奋再梗死时，则又迅速上升，形成“多峰”现象，可以反映局部缺血心肌周期性自发的冠脉再梗死和再灌注。1.心脏外科手术患者血清肌红蛋白升高，可以作为判断心肌损伤程度及愈合情况的一个重要客观指标。2.在临床肌病研究中发现假性肥大型肌营养不良患者血清肌红蛋白也升高。二、血清肌钙蛋白检验肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白，由3个结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白l(Tnl)和肌钙蛋白C(TnC)，它附在收缩的横纹肌细微组织上，Tnl是一种结构蛋白，它与肌动蛋白及原肌球蛋白互相作用。Tnl与肌动球蛋白在静止状态时相结合，抑制肌动球蛋白的ATP酶(ATPase)活性

6、。TnC奋4个能结合钙离子的结合点，当它与细胞内的钙离子结合吋，能导致整个肌钙蛋白构造上的变化。肌钙蛋白放松了肌动球蛋白，让肌动球蛋白与肌浆球蛋白互起作用，而造成肌肉收缩。肌钙蛋白具有的3种同分异构体，其中两种同分异构体是骨酪肌所特有的，一种同分异构体是心肌所特有的，这三种肌钙蛋白的冋分异构体存在着结构上的差异。心肌中的T和I亚基结构不同于其他肌肉组织，心肌钙蛋白T、l(CTNLCTNI)由于分子量小，分别为37000和24000,所以发病后血中浓度迅速升高。应用免疫层析与酶免技术可进行快速检测与定量测定，具冇快速、灵敏、特异的特点。但对于单个标本检查有不便之处。胶乳增

7、强透射比浊法，0前己有试剂盒供应，可在各型自动生化分析仪上使用，通用性强，已在临床上使用，不同型号的生化分析仪应严格按照说明书设定参数和进行操作。(一)心肌钙蛋白T、I的快速检测1.原理应用免疫层析方法测定样品中的特异抗原(CTnl,CTnl＞。测试吋滴加血清样品于样品槽，样品通过毛细管效应沿试纸膜运动，如果样品中含冇特异抗原，试验部位就出现色带，在对照区域内应该奋另一颜色条带作为实验对照。2.试剂(l)CTnT免疫层析试纸条。(2)CTnl免疫层析试纸条。1.操作(1＞将包装纸打开，标记上样品编号。(2)加5〜6滴血清样品到样品槽中。(