退变颈椎间盘中的il-1β、tnfα含量变化及软骨终板钙化的动物实验研究

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1、退变颈椎间盘中的IL-10、TNFa含量变化及软骨终板钙化的动物实验研究王海涛1孙喜龙2刘福成2苏江宁2赵晓勇2（1石家庄市第三医院河北石家庄050011;2河北省人民医院河北石家庄050051）【屮图分类号】R446【】A【】1672-5085（2010）32-0100-04【】目的观察退变颈椎间盘内细胞因子的含量变化情况和颈椎软骨终板钙化与颈椎间盘退变的关系，研宄屮西药治疗退变颈椎间盘对细胞闵子禽量及软骨终板钙化的影响。方法选用25只4月龄新西兰兔，体重2-3kg,随机分为正常对照组、模型浅层组

2、、模型全层组、药物治疗浅层组、药物治疗全层组。建立家兔颈椎动力平衡失调模型，诱导颈椎间盘退变（正常对照组不作处理）。术后7个月，药物治疗组（浅层、全层）给予抗骨增生胶囊和葡立胶囊（剂量按体重折算），灌胃2次/口，连用1个月。1个月后用耳缘静脉气栓法处死各组动物，用双抗夹心EUSA法检测颈椎间盘屮IL-lβ、TNFα抗体含量，并在形态学上评定颈椎间盘退变程度，测定各组动物颈椎软骨终板钙化层厚度，进行组间比较。结果模型浅层组、模型全层组与正常对照组相比较，颈椎间盘屮IL-l&bet

3、a;、TNFα含量明显升高（P<0.01），颈椎软骨终板钙化层明显增厚（P<0.01）。而抗骨增生胶囊与葡立胶囊联合应用治疗退变颈椎间盘对IL-lβ、TNFα含量及软骨终板钙化有明显抑制作用（P<0.05）。结论退变颈椎间盘组织释放多种细胞因子和炎症介质,它们可加速颈椎间盘退变;而软骨终板钙化是颈椎间盘退变的始动因素，二者呈高度正相关。抗骨增生胶囊与葡立胶囊联合作用治疗退变颈椎间盘对IL-lβ、TNFα含量及软骨终板钙化有明显的抑制作用。【关键

4、词】椎间盘退变细胞因子软骨终板抗骨增生胶囊葡立胶囊动物实验研宄近年来研究证实，退变的颈椎间盘组织可释放多种细胞因子和炎症介质,而软骨终板钙化是颈椎间盘退变的始动因素，它们在颈椎病的发生、发展过程中起重要作用。本文拟通过动物实验建立颈椎动力平衡失调模型，诱导颈椎间盘退变，了解退变颈椎间盘内细胞因子的含量变化以及颈椎软骨终板钙化与颈椎间盘退变的关系，测定颈椎软骨终板钙化层厚度，观察中西药治疗对细胞因子的含量及软骨终板钙化的影响，旨在为临床实验研宄提供参考依据。1材料与方法1.1动物选择与分组选用25只4

5、月龄新西兰兔，体重2-3kg,雌雄不分。随机分为正常对照组、模型浅层组、模型全层组、药物治疗浅层组、药物治疗全层组，每组5只。1.2造模方法造模前拍颈椎正侧位X线片（图1）,将兔颈后部剪毛及清洁，按0.2ml/kg体重进行速眠新（兽用）肌注麻醉。麻醉满意后，俯卧位固定于手术台上，碘酒、酒精消毒，取颈背部正中纵向切口，从寰枕关节至第一胸椎棘突处，长约7cm。切开皮肤并牵向两侧，暴露颈背肌，浅层组切除颈背浅肌群（颈斜方肌、头颈菱形肌），全层组切除颈背浅肌群和深肌群（头夹肌、颈夹肌、头最长肌、颈髂肋肌、头

6、半棘肌），止血满意后，间断缝合皮肤切口，术后放至笼中，任其自由活动。正常对照组不作任何处理。造模后7个月拍颈椎正、侧位X线片，可见正常对照组颈椎无明显变化；浅层组颈椎生理曲度变小，侧位片示椎间隙变窄，椎体前缘唇样增生，冇骨赘形成，椎间孔变小；全层组颈椎生理曲度消失，侧位片示椎间隙明显变窄，椎体前缘唇样增生明显，可见较多骨赘形成椎间孔变小（图2、3）。说明成功建立家兔颈椎间盘退变模型。1.3中西药治疗造模术后7个月，将药物治疗组（浅层、全层）家兔给予抗骨增生胶囊（江苏康缘药业股份有限公司提供）和葡立胶

7、囊（山西中远威药业有限公司提供），分别按l.lg/kg和0.06g/kg体重，两药研磨混匀，溶于20ml蒸馏水中，调配成均匀糊状后灌胃2次/日，连用1个月。药物治疗1个月后用耳缘静脉气栓法处死各组动物，切取C4-5和C3-4椎间盘（C3-4椎间盘包括上、下部分椎体）作标本。1.4标本处理1.4.1采用双抗夹心ELISA法测定各组动物C4-5椎间盘组织中IL-lβ、TNFα含量（兔检测试剂盒由上海森雄科技实业冇限公司提供）。1.4.2将各组动物包含上、下部分椎体的C3-4椎间盘经

8、10%中性甲醛固定，用5%硝酸脱钙，再经乙醇逐级脱水，石蜡包埋切片，HE染色，在OlympusBH-2生物显微镜下观察每个正中矢状面颈椎间盘，根据Miyamoto法［1］对颈椎间盘退变程度进行分级评定。并测定每个椎体尾侧软骨终板正中矢状位中心部位的钙化层厚度。1.5数据统计采用SPSS10.0统计软件处理，全部数据采用均数±标准差（x-±s）表示，两样本均数比较t检验，多样本均数比较采用单因素（软骨终板钙化层厚度）和双因素（IL-l&bet