酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风.

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1、酪氨酸酶及其抗体与自身免疫性白癜风摘要:酪氨酸酶是黑素合成的关键酶，可能是白癜风自身免疫的重要抗原。最近发现部分白癜风患者血清中有酪氨酸酶抗体，且与白癜风临床类型和分期密切相关。提示自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关，为其免疫治疗提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。酪氨酸酶是一种7D含铜酶，来源于胚胎神经峭细胞，是黑素代谢和儿茶酚胺的关键酶。Spritz等［1］证实人TR是一种铜结合蛋白，有铜A和铜B位点。离子铜特异性能与人TR结合，一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜

2、结合。组氨酸在铜B位点协调其结合。TR的多肽链的适当折叠对铜结合及其催化活性是关键性的，TR突变可中断铜结合使其催化活性丧失。眼、皮肤白化病是由于TR基因突变所致，该病TRW性患者色素性皮肤损害发生率高［2］。超氧化物负离子能穿透黑素细胞入胞内，TR通过利用2-保护，免受2-细胞毒作用［3,4］。在黑素瘤患者黑素瘤细胞和中抗氧化系统失衡，内源性反应性氧生成，细胞内不能抵御内源性超氧化物的攻击口。白癜风患者血清中TR抗体的生成，提示白癜风的发病与自身免疫有关。酪氨酸酶的抗原性酶是多种自身免疫紊乱性疾病的

3、自身抗原［6］，TR作为抗原必需具备下列条：①酶活跃性；②免疫原性；③能诱导识别自身的抗体。TR能暴露于免疫系统中，从恶性或正常色素细胞来源的TR,可以作为自身抗体产物的靶抗原；TR与蛋白酶等无交叉反应，提示抗TR抗体对TR是特异性的，能表达HII类分子，可作为抗原递呈细胞。人能分泌TR，TR抗体在黑素瘤患者血清中发现，其它恶性肿瘤患者血清中则没有，提示恶性黑素瘤可产生抗TR的抗体［7,8］，TR基因编码抗原能被黑素瘤细胞毒性T细胞识别［9］，显示系统免疫系统能对TR发挥作用［10］。哺乳动物黑素生成

4、由多个基因位点共同参与调控。不同位点基因及相关蛋白具有多种特征性结构位点。哺乳动物色素细胞调节基因有多种，这些基因的最大特点是定位于位点，编码TR。鼠位点基因长70b，定位第7号染色体，人位点基因长Ob,定位11号染色体。鼠及人位点基因均含有个外显子和4个内含子。TR是一种膜糖蛋白，可在中特异性表达。B位点基因编码TRP-1。鼠B位点基因长18b，有8个外显子和7个内含子，定位14号染色体。人B位点基因定位第9号染色体。TRP-1能在中表达且定位黑素体膜，具酪氨酸羟化酶和多巴氧化酶活性。S位点基因编码

5、TRP-2,小鼠S位点基因位于第14号染色体，为多巴色素异构酶。鼠及人P位点基因编码stablin蛋白，人及鼠P位点基因定位第10、12号染色体，参与黑素合成终末途径的调节。TR、gp7、TRP-2结构相似，其基因产物有下列特点：①高同源性。②分子量几乎相同。③三级结构有高度保守序列半胱氨酸残基。④具有酶活性铜结合位点。⑤含有跨膜区。TR是黑素合成的关键酶，其已知的氨基酸序列含有一段前导信号肽和一个跨膜结构基元，与黑素体膜上的锚定蛋白相一致。HLA-A2递呈TR抗原，不同的细胞毒性T淋巴细胞克隆识别具

6、有活性基元的九肽LLAVLLL,说明TR在不同个体的表达呈相当高的同源性。TR的表达均一性优于TRP-2,表达频率亦较TRP-1高。除D8+T细胞外，人D4+T细胞也能特异性识别TR基因编码的相关抗原。黑素瘤患者中检出TR，TR是上的分化抗原。可作为主动免疫的良好抗原靶。TR既受H-I限制，又受H-II限制的黑素瘤共同抗原，诱生的D8+T细胞和D4+T细胞均能产生有效的抗肿瘤应答。TRP-1原位杂交证实编码基因位于人第9号染色体q23区，为IgG抗体识别抗原，具有DHI-2羧酸氧化酶活性，非突变型TR

7、P-1抗原可被HLA-A31特异性TL识别。外源性TRP-1DNA在等中表达。gp100即/特异性蛋白Pel-17，免疫电镜证实gp100主要位于I、II期黑素体膜，广泛表达于人。HLA-A2的gp100可被自体肿瘤浸润性淋巴细胞识别。识别部位是十肽LLDGTATLRL，从gp100提取的十肽能体外诱导TIL，将TIL细胞与IL-2配伍应用于HLA-A2+黑素瘤患者，可消除自发性黑素瘤的转移灶。酪氨酸酶抗体检测方法：TR抗体在白癜风患者血清中检出。Sng等[11]1994年用细菌合成人TR，免疫印迹法

8、检测TR抗体。这种方法相对不敏感且不能定量检测。Baharav等[12]1996年使用蘑菇TR，ELISA法检测TR抗体，此法敏感，但所用蘑菇TR与人TR同源性低。而Xie等[13]1996年则用人提取物作为TR的来源，免疫沉淀法等检测TR抗体。ep等[14]1997年采用放免法检测TR抗体。近来此法已被用来检测自身免疫性疾病患者血清中的特异性抗体［1-17］。这种方法能敏感定量检测抗体。产生、特点、特性：1.抗TR抗体的产生：用人TRDNA转染L细胞，