超高效液相色谱法测定饲料中氯羟吡啶的方法研究

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1、检测技术超高效液相色谱法测定饲料中氯羟吡啶的方法研究贾涛(北京市饲料监察所，北京100107)摘要由于氯羟吡啶的广泛抗球虫作用，使其被普遍长期添加于饲料中，但这种使用方法极易产生耐药性及畜禽肉制品中的氯羟吡啶残留问题，从而危害人体健康。文章以超高效液相色谱法检测饲料中的违禁药物氯羟吡啶，并对检测中应注意的问题加以讨论，此方法具有操作相对简单，所用时间短，具有良好的线性范围，且具有重复性好，变异系数低，定性定量同时检测等优点；经试验：标准曲线r值≥0.996206，变异系数(CV值)≤1.79%，检测回收率≥84.1%，回收率标准偏差≤1

2、.1%。关键词超高效液相色谱；氯羟吡啶；饲料；方法研究中图分类号：S816.17文献标识码：A文章编号：1006-6314(2014)11-0046-041氯羟吡啶的简介氯羟吡啶具有广泛的抗球虫作用，在国内是使用最广泛的抗球虫药之一，对各种鸡球虫病均有效，通常在氯羟吡啶为白色或类白色粉未，无臭；微溶于甲醇或动物饲料中连续用药。氯羟吡啶对球虫的作用峰期主要乙醇，不溶于水、丙酮、乙醚及苯，溶于氢氧化钠溶液。性在孢子发育阶段，能使孢子在上皮细胞内停止发育长达能稳定，可保存3年以上。氯羟吡啶别名：氯吡醇、氯吡60d。由于氯羟吡啶对球虫仅是抑制作

3、用，停药后，孢子啶、氯甲羟吡啶、克球多、可爱丹；英文名称：Clopidol；即能重新发育成长。化学名称：3,5-二氯-2,6-二甲基-4-羟基吡啶；分子式：C7H7C12NO；分子量：192.04；CAS号：2971-90-6。2对氯羟吡啶进行监测的意义通讯作者：贾涛，畜牧师。由于氯羟吡啶对球虫仅有抑制发育作用，加之对畜收稿日期：2013-10-31。禽免疫力有明显抑制效应，必须连续用药，所以被饲喂46动物的肌肉组织中有明显的药物残留。另外，由于长期5.4涡旋振荡器0～2,500rpm。广泛使用，目前多数球虫对氯羟吡啶已经出现明显的耐5

4、.5超声波清洗仪。药性，由于本品结构与喹诺啉抗球虫药类似，又有可能5.6溶剂过滤系统(带真空泵、全玻璃滤器、微孔滤膜存在交叉耐药性。因此对氯羟吡啶药物的使用进行监测0.45μm)。己势在必行，而建立饲料中氯羟吡啶的检测方法也就尤5.7氮吹仪或旋转蒸发仪可控温。其重要。5.8超高效液相色谱仪，带紫外检测器。3检测原理6分析步骤饲料中的氯羟吡啶经乙腈提取，用碱性氧化铝净化6.1试样溶液的制备小柱净化，甲醇复溶后，经超高效液相色谱仪反相色谱准确称取饲料样品5.0g(浓缩饲料3.0g，预混合饲柱分离测定，紫外检测器270nm波长处定量测定，同等

5、料1.0g)，置于50mL离心管中，加入乙腈(4.2)20mL，条件下绘制工作曲线，氯羟吡啶含量与吸光度值在一定置于涡旋振荡器上(5.4)，2,000rpm涡旋振荡1min；置浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。于超声波清洗仪中，超声提取5min，5,000rpm离心4试剂与材料5min，转移全部上清液备用；原离心管中再次加入乙腈(4.2)10mL，重复提取1次，并合并2次上清液备用。本试验所用试剂除特别注明外，均为优级纯；检测6.2试样的净化用水为蒸馏水，色谱用水为超纯水，符合GB/T6682-1992检测用水的规定。将全部试样

6、制备溶液置于预先用5mL乙腈(4.2)活化过的碱性氧化铝上柱上，再次用乙腈(4.2)5mL淋洗碱4.1甲醇(色谱纯)。性氧化铝小柱，15mL甲醇(4.1)洗脱，收集洗脱液于鸡4.2乙腈(色谱纯)。心瓶中，置于旋转蒸发仪上，50℃负压蒸干全部洗脱液，4.3碱性氧化铝净化小柱2g，12mL。加入甲醇(4.1)2mL置于旋涡振荡器上2,000rpm振荡4.4流动相20%乙腈溶液。1min，过0.2μm微孔滤膜(5.3)上UPLC测定。4.5氯羟吡啶标准溶液6.3UPLC测定参数的设定4.5.1氯羟吡啶标准品(国家标准物质中心提供)纯度分析柱：

7、C18，柱长50mm，内径2.1mm，粒度≥99.6%。1.7μm(或类似分析柱)。4.5.2氯羟吡啶标准贮备液准确称取氯羟吡啶标准品柱温：室温。(4.5.1)10mg，用甲醇(4.1)定容至100mL棕色容量瓶中，检测器：紫外检测器，检测波长270nm。超声溶解并摇匀，此溶液浓度相当于100μg/mL，-20℃流动相流速：0.2mL/min。冰箱内避光保存，有效期1年。进针时间：5min。4.5.3氯羟吡啶标准曲线工作溶液准确移取氯羟吡啶进样量：5μL。标准贮备液(4.5.2)0.1mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、6.4标准

8、曲线的绘制2.0mL分别用甲醇(4.1)定容至10mL容量瓶中，摇匀，此标准曲线工作溶液浓度分别相当于1.0μg/mL、以氯羟吡啶标准曲线工作溶液(4.5.3)浓度为横坐5.0μg/mL、10.0μg/mL