甜菜nii基因编码氨基酸偏好及与菠菜nii编码蛋白序列的比较

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1、中国糖料20－1537（4）13试验研究，，：ｉ＿ｄｏｉ0．3570／．ｃｎｋ．ｓｃｃ．205．04．00：11ｉ11ｊ？甜菜ｎ／ｉ基因编码氨基酸偏好及与菠菜ｎｉｉ编码蛋白序列的比较石晓艳ｕ1．珠海市斗门生态农业园管理委员会农业科技推广中心珠海5191002．东北农业大学农学院哈尔滨150030（，；，）摘要－方法从二倍体甜菜Ｔ获得与亚硝酸还原反应相关的ｃＤＮＡ基因片段运用：采用ＲＴＰＣＲ7中ｙ，ＲＡＣＥ技术获得了基因全长序列并命名为ｎｉｉ基因。该基因全长2014ｂ〇ＲＦ长度1800ｂ编码599个

2、，ｐ，ｐ，氨基酸。该基因编码氨基酸残基具有亮氨酸和缬氨酸偏好，编码蛋白结构域与菠菜的高度同源。该基因的获得可为下一步基因的表达与调控研究奠定基础。关键词：甜菜＾基因氨基酸偏好序列比较；；；566－－－．378文献标识码中图分类号：Ｓ：Ａ文章编号：10072624201504000103；Ｑ（）铵态氮和硝态氮是植物生长所必需的氮源甜菜的主要氮源为铵盐和硝酸盐。无机氮素以铵的形态参与，代谢态的氮源被植物吸收后大都是先由植物将其转化成ＮＨ／可被甜菜直接利用合成氨基酸。甜菜，非铵，才必须在体内经过还原才能合成有

3、机含氮化合物＋一根系吸收的硝酸盐。硝酸盐还原为ＮＨ，4，般分两步，先由硝酸还原酶（ＮＲ）还原成亚硝酸盐，再由亚硝酸还原酶（ＮｉＲ）还原为ＮＨ／。－】2［甜菜亚确酸还原酶至少巳在拟南芥］（ＮｉＲ）由ｒａｉｉ基因编码至目前ＡｒｏＪｉＷｏｓｉｓ认ａ／ｉａｒｅａ，截，（ｐ）、烟草4＿＿ｐ5Ｓ78］玉米Ｌ［｜［】稻ｐ】ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）Ｚ？ａｍａｓ．菜（Ｓｉｎａｃｉａｏｌｅｒａｃｅａ1＾（072？ｓａｌｉｖａＬ．碗■＆（、（ｙ）、菠ｐ）、水7）、10＂［1Ｂ［】ＰｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍＬ．

4、）白菜ｒａｓｓｉｃａｃａｍｅｓｉｒｉｓＬ．等高等植物中克隆获得了ｒａｉｉ基因全长序列。本研究以二（、）（ｐ倍体甜菜Ｔｙ7为试材，克隆获得甜菜ｎｉｉ基因，为后续的基因表达与调控研究奠定了基础。1材料和方法供试品种：甜菜品种为二倍体纯系品种甜研7号（Ｔｙ7），种子由哈尔滨工业大学甜菜糖业研究所提供。将甜菜种子在室温下浸种过夜，置于培养皿中251恒温催芽至少24ｈ，然后移至营养钵中室内培养，光照约￣对真叶时就可用于试验18001ｘ温度约为25Ｔ。待幼苗长到24用前4ｈ向营养钵中浇灌30ｍｍＯｌ／Ｌ，。，的ＫＮ

5、03溶液，进行氮光共同诱导培养，然后用于分子生物学操作。根据ＧｅｎＢａｎｋ上已知的甜菜ｎｉｉ的ＤＮＡ部分序列（ＡＦ173663）与已知同属藜科的菠菜ｎｉｉｍＲＮＡ（Ｘ07568）序列进行比对后，使用ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ5．0软件设计引物，在保守区设计上游及下游引物，进行两端未知区域的扩增。引物由上海生工公司和Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司完成。设计的引物如表1。表1试验中采用的引物及序列长度／ｂｐＴｒｎＴＣＧＣ／％3－ＲＡＣＥａｄａｐｔｏｒ含有由ＴａＫａＲａ独特设计的ｄＴ区域及Ａｄａｐｔｏｒ

6、Ｐｒｉｍｅｒ部分－＇＇3－ＲＡＣＥ－－23ｏｕｔｅｒｒｉｍｅｒＳＴＡＣＣＧＴＣＧＴｒＣＣＡＣＴＡＧＴＧＡＴＴＴＳｐ＇＇，，3－ＲＡＣＥ－＾ＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧ－ｉｎｎｅｒｒｉｍｅｒ5ＣＧＣＧＧ＾ＴＣＣＴＣＣＡＣＴＡＧＴＧＡ332ｐ＿’－－2358ＳＰｏｕｔｅｒ5ＴＣＴＡＴＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＧＡＡＴ3．3943．48＇＇－－ＳＰ2358．ｉｎｎｅｒＳＡＧＡＴＧＧＧＡＧＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＡＧＧＣＳ3943．48＇＇＿5－ＲＡＣＥ－－ｏｕｔｅｒｒｉｍｅｒ5ＣＡＴＧＧＣＴ

7、ＡＣＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＣＴＡ323ｐ＇＇＇5－ＲＡＣＥ－－ｉｎｎｅｒｒｉｍｅｒＳＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＴＣＧＡＴＧａ34ｐ＇－ＧＡＴＣＣＡＧＴＣＣＣＡＴＡＧＡ－ＡＰ．．ｏｕｔｅｒ5ＴＴＣＣＴＴｙ2258214545＇＇－ＡＰ－ｉｎｎｅｒＳＣＴＴＡＣＡＡＴＧＡＴＧＴＴＴＧＣＧＡＣＧＧＢ2258．2145．45＇ＳＰ1Ｌ－ＳＳＡＧＴＧＡＡＣＴＴＧＣＴＴＣＴＴＴＡＴＣＴＡＴＧＧ2557．0636．00＇＇ＡＰＩＳ－ＴＧＣＧＡＡＡＴＡＡＧＧＴＴ

8、ＧＧＴＡＡＡＡＧＧＧＣ－ａ2560．3444．00ＲＮＡ的提取参照ＴｒｉｚｏｌＩｎｖｉｔｒｏｅｎ的说明书进行。取ｌｘＬＲＮＡ样品与5ｘＬ6ｘＬｏａｄｉｎＢｕｆｆｅｒ混合后于），（ｇ｜｜ｇ1％的琼脂糖