塔乌库姆冰草肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

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1、６ＧＲＡＳＳＬＡＮＤＡＮＤＴＵＲＦ（２０１４）Ｖｏｌ．３４Ｎｏ．５塔乌库姆冰草肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析李莉１，贾纳提１，张金林２（１．新疆畜牧科学院草业研究所，新疆乌鲁木齐８３００００；２．兰州大学草地农业科技学院，甘肃兰州７３００２０）摘要：根据其他植物Ａｃｔｉｎ基因的保守序列设计一对简引并性物，以塔乌库姆冰草叶片总ＲＮＡ为模板，采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法扩增出Ａｃｔｉｎ基因片段并连接到载体上，阳性克隆经ＰＣＲ检测后进行测序。结果表明：该片段长约６００ｂｐ，编码１９９个氨基酸，所得序列与ＧｅｎＢａｎｋ中注册的其他植物Ａｃｔｉｎ基因序列同源性均在

2、８１％以上，与其他肌动蛋白的氨基酸序列同源性达８８％。关键词：塔乌库姆冰草；肌动蛋白；基因克隆；序列分析中图分类号：Ｓ５４；Ｑ３４４．１３文献标识码：Ａ文章编号：１００９－５５００（２０１４）０５－０００６－０５DOI:10.13817/j.cnki.cyycp.2014.05.002肌动蛋白是真核生物中普遍存在的重要的蛋白ｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）、小花碱茅（Ｐｕｃｃｉｎｅｌｌｉａｔｅｎｕｉｆｌｏ－质，是构成细胞骨架和肌肉肌小节的主要成分，执行着ｒａ）、烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）和向日葵（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ重要的生理功能，如

3、细胞分裂、细胞运动、细胞形状变ａｎｎｕｎｓ）等中克隆到了Ａｃｔｉｎ基因。化、内吞作用、胞吐作用以及多种细胞运动，如顶端生塔乌库姆冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｃｒｉｓｔａｔｕｍｃｖ．Ｔａｗｕ－［１－４］长、细胞器运动、胞质环流、花粉管生长等。高等ｋｕｍｕ）具有极强的抗旱性、抗寒性和适度的耐盐性，且动植物中，肌动蛋白都是由多基因编码。不同生物肌具有品质优良、营养丰富、饲用价值高等优良特［１２－１４］动蛋白具有高度保守性，这些基因高度相似，通过多轮性。目前，由于草原的过度开发和利用而造成草复制由一个基因祖先进化而来［５］。Ａｃｔｉｎ基因在各种地严重退化，利用旱

4、生牧草冰草来有效的改善草地生组织中恒定表达，是一种广泛参与真核细胞生理过程态，恢复和重建退化草原植被，增加饲草产量，减缓我的管家基因，因而常被作为研究其他基因的表达模式国饲料的不足，还可大大提高盐碱地的利用率，为发展及调控机制的分子内标［６］。迄今为止，已在许多高等畜牧业奠定物质基础。以塔乌库姆冰草为材料，克隆植物，如霸王（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌｕｍｘａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ）［７］、碱蓬Ａｃｔｉｎ基因片段，为研究其他重要抗逆功能基因在冰［８］草中的表达和调控机制奠定基础。（Ｓｕａｅｄａｇｌａｕｃａ）、微孔草（Ｍｉｃｒｏｕｌａｓｉｋｋｉｍｅｎ－［９］［１０］

5、ｓｉｓ）、党参（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｐｉｌｏｓｕｌａ）、水稻（Ｏｒｙｚａ１材料和方法ｓａｔｉｖａ）、玉米（Ｚｅａｍａｙｓ）、小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）、１．１试验材料玉兰（Ｍａｇｎｏｌｉａｄｅｎｕｄａｔｅ）、花生（Ａｒａｃｈｉｓｈｙ－［１１］塔乌库姆冰草种子来自新疆畜牧科学院草业研究ｐｏｇａｅａ）、大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＭｅｒｒ．）、拟南芥（Ａｒａ－所。Ｈｏａｇｌａｎｄ营养液水培法培养冰草幼苗至三叶一心期采集叶片，用于总ＲＮＡ的提取。收稿日期：２０１４－０４－１６；修回日期：２０１４－０５－１３１．２试验试剂基金项目：农业科技成果转

6、化资金项目（２０１１ＧＢ２Ｇ总ＲＮＡ抽提试剂盒、ＭＭＬＶ第１链ｃＤＮＡ合成４０００１５）资助试剂盒、ＰＣＲ扩增试剂盒、ＤＮＡ凝胶回收试剂盒、作者简介：李莉（１９７７－），女，甘肃人，助理研究员，硕士，主要从事牧草遗传育种研究工作。ＰＣＲ产物克隆试剂盒和ＤＮＡｍａｒｋｅｒ均购自上海生Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｎｄｌｉｌｉ＠１２６．ｃｏｍ工生物有限公司，其他生化试剂均为进口或国产分析贾纳提为通讯作者。纯产品。第３４卷第５期草原与草坪２０１４年７１．３引物设计与合成从ＮＣＢＩ搜索其他植物的Ａｃｔｉｎ基因序列，进行同源性比较，利用ＤＮＡＭＡＮ和Ｐｒｉｍｅｒ５．０生物

7、软件设计一对简并引物（Ａ１：５′－ＧＴＧＧＴＣＧＴＡＣＡＡＣＷＧＧＴＡＴＴＧＴＧ－３＇；Ａ２：５′－ＧＣＨＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧ－３′；其中Ｗ＝Ａ、Ｔ，Ｈ＝Ａ、Ｃ、Ｔ），用于扩增塔乌库姆冰草Ａｃｔｉｎ基因片段。设计的引物由上海生工生物有限公司合成。１．４总ＲＮＡ的提取图１ＲＴ－ＰＣＲ产物凝胶电泳冰草幼苗总ＲＮＡ提取方法按照试剂盒说明书进Ｆｉｇ．１ＡｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆＰＣＲ行。采用甲醛变性凝胶电泳方法检测提取到的总ｐｒｏｄｕｃｔｏｆＡｃｔｉｎｇｅｎｅＲＮＡ，根据ＯＤ值鉴定所提ＲＮＡ的纯度（若Ｄ２６０ｎｍ／

8、注：Ｍ．１４００ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１．Ａｃｔｉｎ基因的ＰＣＲ产物Ｄ２８０ｎｍ的比值在１．８～２．０，则