多种产前分子诊断技术在产前诊断中的应用

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1、多种分子技术在产前诊断中的应用郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心孔祥东2016.8优生优育是我国一项基本国策预防出生缺陷提高人口素质出生缺陷的原因•宫内环境因素（非遗传性）•遗传性因素出生缺陷预防的两个目标•克服环境因素导致的出生缺陷•克服遗传因素导致的出生缺陷环境因素出生缺陷的预防•单纯环境因素或环境和遗传因素共同作用导致的出生缺陷所占比例高•导致出生缺陷的环境因素病毒、细菌、辐射、药物、孕母疾病、情绪等因素•环境因素导致的出生缺陷特点不确定性，难以控制性因素较多环境因素出生缺陷预防较为困难单一遗传

2、因素出生缺陷的预防•单纯遗传因素导致出生缺陷所占比例低•遗传因素导致的出生缺陷特点遗传病病因大多明确，可通过遗传学手段明确诊断遗传病有特定的遗传方式，不受环境因素的影响，可准确预测发病风险已知病因的遗传病预防相对容易实现定点，明确、高效遗传病三级防治•一级防治——孕前隐性遗传病筛查•二级防治——PGD，产前基因诊断，胚胎、宫内基因治疗•三级防治——新生儿筛查、治疗（基因治疗）相对于常见病、多发病，遗传病已经成为最容易防治的疾病产前诊断遗传病分类•染色体病46条染色体异常导致的疾病唐氏综合征，Turner综

3、合征，流产•基因组拷贝数异常染色体微重复、微缺失疾病DiGorge综合征，流产等•单基因病编码基因的突变导致的疾病遗传性耳聋苯丙酮尿症白化病血友病产前遗传学诊断的方法•染色体病常规：核型分析快速：FISH、QF-PCR、MLPA、BoBs•基因组拷贝数变异染色体微阵列分析、高通量测序、FISH、MLPA•单基因病PCR、Sanger测序、高通量测序、DNA芯片产前基因诊断步骤1.病因学诊断先证者基因诊断2.携带者诊断先证者亲属基因诊断3.预测胎儿患病风险胎儿产前诊断产前基因诊断材料的种类产前基因诊断=胎儿

4、取材+基因诊断•绒毛、羊水、脐血介入性产前诊断•受精卵卵裂球胚胎植入前基因诊断•孕母游离DNA无创性胎儿基因诊断介入性产前诊断羊膜腔穿刺•最常用的侵袭性产前诊断技术•时间：孕18～30周•用途：胎儿染色体病和单基因遗传病的产前诊断•安全：与之相关的流产率0.1-0.2％绒毛活检（CVS）•孕10周-14周•经腹或经宫颈CVS•流产率0.2-0.5%www.themegallery.com脐静脉穿刺•18-32周•进入胎儿循环•羊水或绒毛检查失败补救快速胎儿核型分析胎儿宫内感染的诊断胎儿血液系统疾病产前诊断

5、•安全：流产率1％染色体病产前诊断技术比较报告产前诊断细胞检测所覆盖染色体仪器要求时间技术培养成本23对染色体显微镜核型分析是14-21低13,18,21,X,Y染色体荧光显微镜FISH否5-7天高13,18,21,X,Y染色体PCR仪，测QF-PCR否<48h低序仪13,18,21,X,Y染色体PCR，测序MLPA否<48h低仪13,18,21,X,Y染色体和9种微流式荧光检BoBs否<72h高缺失综合征测仪，软件技术比较报告产前诊断细胞检测所覆盖染色体仪器要求时间技术培养成本23对染色体显微镜核型分析

6、是14-21低13,18,21,X,Y染色体荧光显微镜FISH否5-7天高13,18,21,X,Y染色体PCR仪，测QF-PCR否<48h低序仪13,18,21,X,Y染色体PCR，测序MLPA否<48h低仪13,18,21,X,Y染色体和9种微流式荧光检BoBs否<72h高缺失综合征测仪，软件病例分析孕妇，张某，38岁，唐筛高风险（1/30）分析方法：样本类型：羊水快速染色体非整倍分析孕周：18+3W细胞培养核型分析三体峰三体峰三体峰病例分析孕妇，张某，38岁，唐筛高风险（1:30）21-三

7、体！样本类型：羊水三体峰24小时出结果三体峰孕周：18+3W三体峰QF-PCR结果病例分析羊水培养核型分析结果：47,XY,+2115天出报告荧光定量PCR技术在产前诊断中的应用专家共识中华妇产科杂志2014年8月染色体病产前诊断策略染色体核型快速诊断（5ml羊水DNA提取）FISH、MLPA、QF-PCR、BoBs（初步诊断）染色体羊水核型分析（15ml羊水培养制备）（结果验证）综合比较，得出结论抽取羊水后，先快速诊断，再核型羊水制备，综合比较，得出结论！！！胎儿核型分析的局限性常规羊水染色

8、体分析发现微小异常，但无法明确与定位；超声或MRI发现多发畸形，但羊水染色体分析结果正常；怀疑胎儿染色体异常，但无条件进行胎儿染色体分析。早中孕流产、停育、死胎组织难于培养染色体数目异常和大片段的结构变异，小片段的结构改变不能检出或识别染色体拷贝数变异染色体微阵列分析染色体拷贝数变异拷贝数变异(Copynumbervariation,CNV)是一般指长度为1kb以上的基因组大片段的拷贝数增加或者减少主要表现为亚显微水