应用alc基因开关系统在糙皮侧耳中表达绿色荧光蛋白

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1、河南农业科学，２０１４，４３（５）：１１８－１２３ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ应用ａｌｃ基因开关系统在糙皮侧耳中表达绿色荧光蛋白赵帅举，张宇，王景冒，左勇涛，戚元成，申进文，邱立友＊（河南农业大学生命科学学院／农业部农业微生物酶工程重点实验室，河南郑州４５０００２）摘要：为探明担子菌糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）中是否存在与构巢曲霉相似的乙醇代谢调控机制，及能否在糙皮侧耳中应用构巢曲霉ａｌｃ基因开关系统调控表达外源基因，从糙皮侧耳ＰＣ１５ｖ２．０基因组数据库中电子克隆得到其假拟乙醇脱氢酶

2、基因（ａｌｃＡ）及其上游序列，该基因上游１３１７ｂｐ序列中含有１个正向和２个反向调控因子ＡｌｃＲ蛋白的特异性结合位点序列。将构建的含有ａｌｃＡ基因启动子控制绿色荧光蛋白基因表达的质粒ｐＥＧＦＰ－Ｃ１－ＰａｌｃＡ转入糙皮侧耳天达３００中，转化子在含有葡萄糖的培养基中没有绿色荧光蛋白表达，在含有乙醇的培养基中则有绿色荧光蛋白表达。综合上述，糙皮侧耳的乙醇代谢调控机制与构巢曲霉相似，仅用构巢曲霉的ａｌｃＡ基因启动子替代目的基因的启动子即可在糙皮侧耳中有效调控目的基因的表达。关键词：糙皮侧耳；基因开关；诱导表达；绿色荧光蛋白中图分类号：Ｓ６４６．１＋４

3、１文献标志码：Ａ文章编号：１００４－３２６８（２０１４）０５－０１１８－０６ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧｒｅｅｎＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰｒｏｔｅｉｎＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄｂｙａｌｃ－ｇｅｎｅＳｗｉｔｃｈｉｎＰｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓＺＨＡＯＳｈｕａｉ－ｊｕ，ＺＨＡＮＧＹｕ，ＷＡＮＧＪｉｎｇ－ｍａｏ，ＺＵＯＹｏｎｇ－ｔａｏ，＊ＱＩＹｕａｎ－ｃｈｅｎｇ，ＳＨＥＮＪｉｎ－ｗｅｎ，ＱＩＵＬｉ－ｙｏｕ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｚｙｍｅＥｎｇ

4、ｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｉｆｔｈｅｒｅｉｓａｓｉｍｉｌａｒｅｔｈａｎｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｏＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓｉｎＰｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ，ｔｈｅｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌａｌｃｏｈｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｇｅｎｅ（ａｌｃＡ）ａｎｄｉｔｓｕｐｓｔｒｅａｍｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙｅｌｅｃｔ

5、ｒｏｎｉｃｃｌｏｎｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｒｏｍＰ．ｏｓｔｒｅａｔｕｓＰＣ１５ｖ２．０ｇｅｎｏｍｅｄａｔａｂａｓｅ．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｏｎｅｆｏｒｗａｒｄａｎｄｔｗｏｒｅｖｅｒｓｅＡｌｃＲｓｐｅｃｉｆｉｃｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓｉｎｔｈｅｕｐｓｔｒｅａｍｒｅｇｉｏｎ（１３１７ｂｐ）ｏｆａｌｃＡ．Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｆｅｔｈａｎｏｌ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅａｌｃ－ｇｅｎｅｓｗｉｔｃｈｆｒｏｍＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎＰ．ｏｓｔｒｅａｔｕｓ，ｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆａｌｃＡ（ＰａｌｃＡ）ｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｐｌａｓｍｉｄｐＥ

6、ＧＦＰ－Ｃ１ａｎｄｆｕｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ（ＧＦＰ），ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｐＥＧＦＰ－Ｃ１－ＰａｌｃＡ．ＴｈｅｐｌａｓｍｉｄｐＥＧＦＰ－Ｃ１－ＰａｌｃＡｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＰ．ｏｓｔｒｅａｔｕｓＴＤ３００．ＴｈｅＧＦＰｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｗｈｅｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｌｃｏｈｏｌ，ｂｕｔｄｉｄｎｏｔｅｘｐｒｅｓｓｗｈｅｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒ

7、ｍａｎｔｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｇｌｕｃｏｓｅ．Ｏｖｅｒａｌｌ，ｔｈｅｅｔｈａｎｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎＰ．ｏｓｔｒｅａｔｕｓｉｓｓｉｍｉｌａｒｔｏＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓ，ａｎｄｒｅｐｌａｃｉｎｇｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｂｙＰａｌｃＡｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰ．ｏｓｔｒｅａｔｕｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ；ｇｅｎｅｓｗｉｔｃｈ；ｉｎｄｕｃｉｂｌ

8、ｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ收稿日期：２０１４－０１－０１基金项目：河南省重点科技攻关项目（０８２１０２１５