绿色荧光蛋白的基因克隆及表达

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1、学号08114010214编号2011140214班级生科0802HUBEINORMALUNIVERSITY分子生物学综合实验论文论文题目绿色荧光蛋白的基因克隆和表达作者姓名饶慧指导教师王友如所在院系生命科学学院专业名称生物科学完成时间2011.5.30目录引言11材料与方法41.1材料41.1.1实验材料41.1.2仪器设备41.1.3试剂及溶液51.2方法71.2.1重组质粒的构建71.2.2DH-5α和BL-21感受态细胞的制备71.2.3感受态细胞的转化71.2.4碱法提质粒81.2.5酶切鉴定81.2.6琼脂糖凝胶电泳91

2、.2.7PCR-聚合酶链式反应91.2.8pET-28a-GFP重组质粒转化到表达菌BL-21101.2.9重组绿色荧光蛋白（GFP）的诱导表达102结果与分析112.1提取质粒112.2重组质粒构建的鉴定122.3PCR检测结果122.4IPTG诱导表达133讨论14参考文献16致谢18绿色荧光蛋白的基因克隆和表达研究饶慧（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院生物科学0802班湖北黄石435002）摘要：目的：研究绿色荧光蛋白（GreedFluorescentProtein，GFP）基因的基因克隆及在大肠杆菌中的表达。方法

3、：通过分别将DH-5α(pEGFP-N3)和DH-5α(pET-28a)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入E.coliDH-5α感受态细胞中进行转化,通过限制性核酸内切酶NotI与BamH1和PCR对所建质粒进行分析鉴定后,通过转化的方法把含绿色荧光蛋白（GFP）外源基因转入大肠杆菌体BL-21内进行表达，再用IPTG诱导GFP基因表达，可以看到显现绿色，判断GFP基因在大肠杆菌中成功表达。结果：结果显示构建的重组质粒pET-28a-GFP在E.coli中成功表达。关键词：绿色荧光蛋白；质粒重组；

4、原核表达；诱导表达中图分类号：Q53StudiesOnCloningandExpressionofGreenFluorescentProteingeneRaoHui(Tutor:Wangyouru)(Class0802,CollegeofLifeSciences,HubeiNormalUniversity,Huangshi,435002)Abstract:Objective:StudiesindicatedthatthecloningandexpressionoftheGFPgeneintheE.coli.Methods:Extra

5、cttheplasmidoftheDH-5α(pEGFP-N3)andDH-5α(pET-28a).ThencuttingbyenzymeandconnectingthetwoplasmidstoformpET-28a-GFPrecombinedplasmid.TherecombinantplasmidconfirmedbyrestrictionenzymeandPCRtransfectedintoE.coliDH-5αtoensuretheexpressionofgreenfluorescentprotein.Guidingthe

6、recombinedplasmid,whichcontainsexogenousgenesofGFPintoE.coliforexpression,throughtransformativemethod.TheexpressionofGFPgenecanbeinducedbytheIPTGandthenwecanseegreen.Results:TheresultssuggestthatpET-28a-GFPrecombinedplasmidhassuccessfullyexpressedinE.coli.Keywords:GedF

7、luorescentProtein;RecombinedPlasmid;ProkaryoteExpression;InducedExpression湖北师范学院分子生物学实验论文绿色荧光蛋白的基因克隆和表达的研究饶慧（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院湖北黄石435002）引言随着分子生物学和基因工程技术的迅速发展和广泛应用,人们根据自己的意愿有目的、有计划、有根据、有预见地将外源基因导入动物细胞内,使外源基因进行表达、阐明基因表达的调控机理或者通过与染色体基因组进行稳定整合，将生物性状传递给子代动物的研究方兴未艾[1]。

8、　基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而引起了科学家的广泛关注，现已被普遍应用到分子生物学研究的各个方面。荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色