绿色荧光蛋白的基因克隆与表达论文

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1、湖北师范学院分子生物学综合试验论文论文题目作者姓名专业名称准考证号指导教师绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达樊恒达生物技术2008114020308王友如中国•黄石绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达樊恒达(湖北师范学院生命科学学院0803班学号:2008114020308,湖北黄石)摘要目的：研究绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达。方法：从E.coliDH5a中用碱法提取质粒的方法提取质粒pET-28a-GFPo然后用质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒。再用

2、限制性内切酶BamHl和Notl对成功提取的质粒进行酶切，并用质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳对酶切后的质粒进行电泳，用以确定己经提取的质粒中含有GFP基因。将含有GFP基因的质粒转化到感受态细胞E.coliBI-21中，用LB培养基对转化后的E.coli进行扩大培养。最后用IPTG诱导GFP基因表达可以看到浅绿色菌落。结论：本实验对学生掌握最基本的分子生物学试验技术奠定了基础。关键词：绿色荧光蛋白基因克隆重组表达转化GreenFluorescentProtein(GFP)GeneCloningandExpressionFanHengda(class3grade&collegeofbiol

3、ogyscience,HubeiNormaluniversity,HuangShi):AbstractObjective：searchingforthephenomenonofgreenfluorescentproteingene'scloningandrestructuringexpressionintheE.coli.Method：drawingplasmidpET-28a-GFPfromE.coliDH5abyusingthemethodofAlkaliDistillation.Thentheselectedproductioncanbeelectrophoredbyusing

4、theAGE,inordertomakesuredrawingsuccessfullyplasmidfromE.coli.TheselectedplasmidiscuttingbytheextinctionenzymesBamHIandNotlandtheslicedplasmidcanbeelectrophoredbyusingtheAGEinordertoensuretheselectedplasmidcontainingGFPgene•ConvertingtheplasmidhavinggeneofGFPintothefeelingstatesE.coliBL-21cellsa

5、ndcultivatingitlargelythroughtheLBmedium.FinallytheIPTGcanguidetheexpressionofGFPgeneandwecanseelightgreenclonies•Conclusion：Thisexperimentsetsupfoundationforstudentstomasterthebasicalexperimentaltechnologyofmolecularbiology.引言3材料与方法31材料31・1材料31・2仪器31.3试剂32方法32.1重组质粒(pET-28a-GFP)的构建32.2碱法提取质粒42

6、.3质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳42.5.E.coliDH5a感受态细胞的制备及转化42.6扩大培养42.7GFP蛋白的诱导表达5结果51实验现象51.1碱法提収质粒51.2碱法提取质粒电泳51.3酶切质粒电泳51.4重组质粒的转化及阴阳性对照61.5GFP蛋白的诱导表达结果61.6紫外灯下看到的绿色荧光蛋白77讨论7参考文献8引W：2008年10月8口，瑞典皇家科学院把今年的诺贝尔化学奖授予绿色荧光蛋白（GFP）的发现者和推广者。⑴绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）是一类存在于包括水母、水蝗和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。当受到紫外或蓝光激发吋

7、，GFP发射绿色荧光。它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋口质一级序列固有的。近年来在生物化学和细胞生物学中成为应用最为广泛的标记性蛋白之一。基因克隆技术包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA,然后送入受体生物中去表达，从而产牛遗传物质和状态的转移和重新组合。采用重组DNA技术，将不同来源的DNA分子在体外进行特异切割，重新连接，组装成一个新的杂合DM分子。在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞屮