分子诊断试验的方法学验证

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1、临床分子诊断临床分子诊断方法学验证要求方法学验证要求关明复旦大学附属华山医院检验医学科分子诊断面临的挑战•涉及方法较多，如PCR、荧光定量PCR、测序等；•实验步骤较多，包括标本的分离保存、处理、检测；•手工程度较高，自动化程度普遍偏低，较多依赖手工，不同的实验室条件和操作者等因素对实验结果的影响较大；•尚未建立公认的质量管理标准等；•更高的准确性要求；•结果报告缺乏标准化；•……CONTENTSCONTENTS•SUMMARYOFCHANGES•UNDERSTANDINGTHE2010CAPA

2、CCREDITATIONCHECKLISTCOMPONENTS•HOWTOINSPECTUSINGR.O.A.DINSPECTIONTECHNIQUE•ADDITIONALINFORMATION•APPLICABILITY•PROFICIENCYTESTING•QUALITYMANAGEMENTANDQUALITYCONTROLGENERALISSUESPROCEDUREMANUALASSAYVALIDATIONREQUISITIONSSPECIMENHANDLINGSPECIMENPROCES

3、SINGQUANTITATIVEASSAYS:CALIBRATIONANDSTANDARDREAGENTSCONTROLSANALYSISExtractionAmplificationRestrictionEndonucleasesSequencingDetectionMethodsAgaroseandPolyacrylamideGelElectrophoresisReal-TimePolymeraseChainReaction(PCR)ArraysPOSTANALYSISResultsRepo

4、rtingRecordsPARENTAGEANDFORENSICIDENTITYTESTINGINSITUHYBRIDIZATION(ISH)FluorescenceInSituHybridization(FISH)BrightfieldInSituHybridizationPERSONNELPHYSICALFACILITIESANDEQUIPMENTINSTRUMENTSSpectrophotometersSignalDetectionInstrumentsFilmProcessing/Pho

5、tographicEquipmentElectrophoresisEquipmentandPowerSuppliesPipettesThermometersandTemperature-DependentEquipmentSpace•LABORATORYSAFETYRADIATIONSAFETYCONTENTS•SUMMARYOFCHANGES•UNDERSTANDINGTHE2010CAPACCREDITATIONCHECKLISTCOMPONENTS•HOWTOINSPECTUSINGR.O

6、.A.DINSPECTIONTECHNIQUE•ADDITIONALINFORMATION•APPLICABILITY•PROFICIENCYTESTING•QUALITYMANAGEMENTANDQUALITYCONTROLGENERALISSUESPROCEDUREMANUALASSAYVALIDATIONREQUISITIONSSPECIMENHANDLINGSPECIMENPROCESSINGQUANTITATIVEASSAYS:CALIBRATIONANDSTANDARDREAGENT

7、SCONTROLSANALYSISExtractionAmplificationRestrictionEndonucleasesSequencingDetectionMethodsAgaroseandPolyacrylamideGelElectrophoresisReal-TimePolymeraseChainReaction(PCR)Arrays不同认可体系对方法学验证的要求•差异:CAP的“方法学验证（assayvalidation）”和ISO15189中的“诊断性验证（diagnostic

8、validation）”•共同点：新的检测方法应用到病人临床诊断之前必须进行方法学验证，以了解该检测的临床表现，保证实验结果可信度[5-7]。•CAP提出了明确的要求：“实验室必须进行分析验证各项检测的性能参数”，还对验证试验覆盖的标本范围（如不同的基因型等）、标本类型（如血液、尿液、新鲜/冷冻组织、石蜡包埋组织等）、验证的参数（如参考值、报告范围、准确度、分析灵敏度、分析特异性和精确度等）做了相应的规定。[5]GuzelO,GunerEI.ISO15189accreditation:Requi