关于快速测定血红素蛋白粉中卟啉铁含量的研究

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1、动物源性蛋白与活性肽（上海杰隆生物制品股份有限公司协办）关于快速测定血红素蛋白粉中卟啉铁含量的研究汪洋吕小东江国永(上海杰隆生物制品股份有限公司，上海201210)血红素蛋白粉是以新鲜的动物血为主要原料，采用2.1标准曲线的测定先进的生物提取工艺提纯精制而成，富含高纯度卟啉铁准确称取经105℃干燥至恒重的血红素标准品的新型蛋白原料。提取过程不加任何化学试剂，确保产10.00mg，用0.1mol/L氢氧化钠充分溶解并定容至100mL品绿色天然本质。产品的机体吸收利用率超过90%，无容量瓶中作为标准品储备液。吸取此储备液10mL加于耐药性、无残留

2、、无毒副作用，是21世纪最为理想的高100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度，摇效畜用补铁蛋白原料。匀，配成10μg/mL的标准使用液。再利用0.1mol/L氢氧卟啉铁以0.1mol/L氢氧化钠为溶剂配置成的溶液化钠将标准使用液分别稀释成0.0μg/mL、1.0μg/mL、在300～400nm波长之间扫描吸收光谱，在(385±2)nm2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL的浓度，波长处有最大吸收。血红素蛋白粉以0.1mol/L氢氧化钠用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零，于385nm处测定吸光

3、度，为溶剂溶解后，采用紫外分光光度计能直接测定血红素并绘制卟啉铁浓度-吸光度标准曲线。蛋白粉中卟啉铁的含量。该方法快速、准确，操作简单。2.2样品的测定取不同批次血红素蛋白粉(编号A-E，共5份)，准1材料确称取一定量，一边研磨一边加入0.1mol/L氢化钠溶液，1.1试验设备充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体加紫外分光光度计，U-2910，HITACHI。于100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度，1.2试验试剂摇匀，用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零，于385nm处测卟啉铁标准品(Sigma公司)、0

4、.1mol/L氢氧化钠溶液、定吸光度，依据标准曲线计算样品中卟啉铁含量。血红素蛋白粉(由上海杰隆生物制品股份有限公司提供)。2.3重复性试验准确称取一定量血红素蛋白粉，一边研磨一边加入2方法0.1mol/L氢化钠溶液，充分溶解后定容至100mL容量瓶中。吸取10mL液体加于100mL容量瓶中，加入0.1mol/通讯作者：江国永。收稿日期：2014-10-27。L氢氧化钠定容至刻度，摇匀，用0.1mol/L氢氧化钠作54空白调零，于385nm处测定吸光度，重复以上操作5次，处的吸光度，检测结果见表2。检测结果表明血红素蛋白依据标准曲线计算样品中

5、卟啉铁含量。粉中卟啉铁含量均在13.50%以上。2.4回收率试验3.3按照上述方法测定血红素蛋白粉在385nm处的吸准确称取两份一定量的血红素蛋白粉，一边研磨，光度，进行重复试验，检测结果见表3，变异系数0.83%，一边加入0.1mol/L氢化钠溶液，充分溶解后定容至表明该方法测定样品中卟啉铁含量有很好的重复性。100mL容量瓶中。吸取10mL液体和1mL方法2.1中3.4按照上述方法进行回收实验，测定结果见表4。加标准品储备液加于100mL容量瓶中，吸取10mL液体和入1mL标准储备液和2mL标准储备液测得回收率分别为2mL方法2.1中标准

6、品储备液加于另一100mL容量瓶98.99%和99.53%。中，分别加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度，摇匀，用3.5按照上述方法分别对放置0h、0.5h、1h、4h、12h0.1mol/L氢氧化钠作空白调零，于385nm处测定吸光度，后的样品进行测定，结果见表5。放置12h内吸光度基本依据标准曲线计算试样中卟啉铁浓度。无变化，表明该方法测定样品中卟啉铁含量稳定性较好。2.5稳定性试验4讨论准确称取一定量的血红素蛋白粉，一边研磨，一边加入本试验采用分光光度计直接测定血红素蛋白粉中卟啉铁0.1mol/L氢化钠溶液，充分溶解后定容至100mL

7、容量瓶中。含量，相对于MIBK法和硝化络合分光光度法等方法操作非吸取10mL液体加于100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢氧常简便，检测结果可靠性高，无害无污染，且很多试验表明，化钠定容至刻度，摇匀，放置0h、0.5h、1h、4h、12h该方法与其他方法检测结果差异无统计学差异，在快速检测后用0.1mol/L氢氧化钠作空白调零，于385nm处测定吸光度。血红素蛋白粉卟啉铁含量方面值得推广，适用于对血红素蛋3结果白粉生产和使用等过程中的卟啉铁含量监控。表2不同血红素样品中卟啉铁含量测定结果3.1按照上述方法测定标准浓度血红素在385nm处的

8、样品编号样品质量(g)吸光度卟啉铁含量吸光度，各点重复5次检测结果见表1。可以看出该方法A0.3970.43114.01%B0.4140.44513.87%检测标准