牛奶中蛋白质含量的测定-凯氏定氮法

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1、牛奶中蛋白质含量的测定----凯氏定氮法一：实验目的：掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理学会凯氏定氮法的操作技术二：实验原理：◆蛋白质的含氮量较恒定，一般为16%，上下略有浮动◆N/16%=N*6.25=蛋白质的含量◆样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收，再以标准盐酸溶液滴定，测出释放的氨含量，并计算氮素含量，再乘以6.25即为蛋白质的含量。◆整个过程分三步：消化、蒸馏和吸收、滴定1：消化：蛋

2、白质+H2SO4→（NH4)2SO4+SO2↑+CO2↑+H2O瓶颈45度角倾斜2：蒸馏：消化液+氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3↑＋Na2SO4＋2H2O3：吸收与滴定（1）用4%硼酸吸收（2）用盐酸标准溶液滴定（3）混合指示剂（甲基红—溴甲基酚绿混合指示剂）指示剂：红色———→绿色———→红色（酸）吸收（碱）滴定（酸）3NH3+H3BO3→(NH4)3BO3(NH4)3BO3+3HCl→3NH4Cl+H3BO3三：实验步骤1、消化：准确量取牛奶0.5mL，移入干燥的凯氏烧瓶中（勿

3、粘附在瓶壁上），加入0.2g硫酸铜、0.3g硫酸钾、10mL浓硫酸，小心摇匀，于通风橱内消化（先小火，待炭化完全后，加大火力至溶液呈蓝绿色），冷却至室温，定容至25mL。同时消化一份空白试剂为对照。2、蒸馏、吸收◆取40mL硼酸溶液于锥形瓶中，加2d混合指示剂，置于冷凝管下端，为接受瓶。◆量取5mL样品消化液由加料口加入反应室，用5mL蒸馏水冲洗加料口，再加入40%NaOH10mL（溶液呈蓝褐色），不要摇动，立即封口。◆夹紧缓冲管下口，开始蒸馏，当接收瓶溶液颜色变化时，继续蒸馏3-5min，下降接收瓶，使硼酸液面离开

4、冷凝管口，继续蒸馏1min，用蒸馏水淋洗浸入硼酸的管外壁，移出接收瓶，滴定。3、滴定◆用0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定接收瓶内的反应液◆同时做空白对照四：实验结果计算：×5W—蛋白质的质量分数，%；c—盐酸标准液的浓度，mol/L；1—空白滴定消耗标准盐酸液量，mL；V2—样品滴定消耗标准盐酸液量，mL；m—样品体积，mL；0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol；F—蛋白质系数。