人血清肾上腺素能受体激动剂章鱼胺测定方法的研究.doc

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1、人血清肾上腺素能受体激动剂章鱼胺测定方法的研究作者：邱伟强，陈舜胜，王建中，王敏，曲映红 【摘要】 目的建立测定人血痒清中章鱼胺含量的高效液相旰色谱学方法。方法采用ph钷enomenexlunaC18柱，以mol·L-轧1柠檬酸与mol·L-1旧磷酸二氢钠为流动相，流速泣为ml·min-1；柱温黍为30℃；检测波长λ=2瘢20nm。结果章鱼胺在～徊50μg·ml-1范围内哟线性关系良好,相关系数为⒀9,平均加样回收率为%，土RSD为%。最低检出浓度东为μg·ml-1。结论该法操作简便，结果可靠，可罴用于人血清中章鱼胺含量的碍测定。初步检测，健康青少貊年血清章鱼胺含量为μg·

2、鹁ml-1，成年人为μg·ぁml-1。【关键词】 羯高效液相色谱法；章鱼胺；臁人血清章鱼胺作为人体内源性的生物胺，在人体内有楞重要的生理作用。近年来药机理学的研究显示了在人的中德枢神经系统与交感神经系统自然产生的章鱼胺具有神经伍介质的功能，并且是一种优蹭秀的选择性的β3-肾上腺络素能受体激动剂［1］。相筹对于儿茶酚胺类化合物如肾」上腺素和去甲肾上腺素，章鱼胺被认为是对β3-肾上⒌腺素能受体最有选择性的物蘖质。内源性章鱼胺和β3-肾上腺素能受体相互作用在砘生理学上的相关性在脂肪组骺织和其它表达β3-肾上腺皴9/9素能受体的器官，特别是心耍脏和中枢神经系统被高度重阐视［2］

3、。同时，章鱼胺在景能量的平衡与代谢的调节上校也有重要的作用［3～5］摧。章鱼胺在人体内可以因单鹕胺氧化酶作用而被降解，而单胺氧化酶活性过强与抑郁怫症等精神疾患有关。用单胺昙氧化酶抑制剂对患者治疗时嵊，其体内的章鱼胺会积累［梓6］。因此，人血清章鱼胺匹含量有可能作为一项血液临洇床生化检验项目，在病理学洮和药理学的研究中有潜在的价值。但章鱼胺生物学意义与生理学作用尚未被充分笋认识，为充分认识章鱼胺对卅各种疾病的作用，检测生物烊样品中尤其是人类血清中的祉章鱼胺含量是很有必要的。钧生物样品中章鱼胺含量的测飓定方法已经有很多种，包括哩放射酶学测定法［7］、毛细管气相色谱-负化学电

4、离质谱法［8］、柱前衍生-⑥RP-HPLC方法［9～涟11］、光纤LED诱导荧唷光毛细管电泳检测法［12荻］，虽然放射酶学测定法在岖过去经常用来测定生物样本茛中章鱼胺含量，但是实验操拷作过于复杂而且不稳定。而瀛柱前衍生-RP-HPLC蚶方法则实验操作也复杂且衍贬生试剂昂贵。在本研究中，氓我们建立了快速有效的不需筢衍生物处理的人血清中章鱼胺HPLC分析方法，同时锆测定了2个年龄段健康人群的血清章鱼胺含量，提供了漆人血清中章胺含量的初步数据，为与章鱼胺相关的病理禽学和药理学研究提供了有效略手段。1  材料与仪器9/9 试剂章鱼胺标准品(盐酸盐,纯度≥95%)(Sigm

5、a公司)；磷酸二萍氢钠,柠檬酸均为分析纯,护上海化学试剂采购供应站购买。 仪器岛津SCL靠210Avp高效液相色谱锈仪；岛津SPD210Av餐p紫外检测器；岛津KUB委OTA520离心机，岛津象SK8200HP超声仪。捩 血清样品血清样品由绅上海市市东医院检验科XX卒-06提供，A组为初中生醯毕业体验17人，B组为某公司员工体检20人。按常辱规抽血制备血清，除供血液坷生化检验用，余作本研究用薇。2 方法与结果 色疮谱条件色谱柱为pheno青menexlunaC18茸(150mm×mm,5μ荠m)。以mol·L-1柠嵛檬酸与mol·L-1磷酸膘二氢钠为流动相，pH调为箸,流速

6、:ml·min-1试，紫外检测波长:220nm,进样体积:20μl。 检测波长由于人血清中章墚鱼胺的含量很低，且人血清优中成分复杂，检测人血清中敕章鱼胺的含量时容易受其他绂物质干扰，因此检测波长的筚正确选择对人血清中章鱼胺推的检测非常重要。章鱼胺在拶274nm和220nm处粗都有吸收峰［2，13］，膘9/9分别取章鱼胺标准品，用流测动相配制成浓度分别为4，勐6，10μg·ml-1的惠3种浓度的章鱼胺溶液，按杼照分光光度法，在200～糖300nm波长范围内用分禽光光度计进行扫描，通过扫遛描发现，3种浓度的章鱼胺奁溶液在274nm处吸收较镓小，在220nm吸收最大写，且在220n

7、m处不受p矽H与浓度的影响，因此用H檑PLC检测时选择220n蒹m作为章鱼胺的检测波长。染 样品溶液的制备人血清用流动相稀释5倍,然后经怍微孔滤膜(μm)滤过,装铼入进样瓶中,备用。 标谜准溶液的制备及鉴定称取章鱼胺标准品,用流动相配成痖总浓度为40μg·ml-幔1的混合标准品溶液,按色篝谱条件进样20μl得色谱哀图(见图2A)。 方法学考察 最小检测浓度取踔章鱼胺标准品溶液,进样2肘0μl,记录色谱图。当色悃谱峰的峰高为噪音3倍时(ヶs/n=3),章鱼胺的浓μ度为最小检测浓度,为μg