T∕SDNY 036-2022 韭菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法

《T∕SDNY 036-2022 韭菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

ICS65.020.01CCSB17团体标准T/SDNY036—2022`韭菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法RapiddetectionofprocymidoneinleekColloidalgoldimmunochromatographymethod全国团体标准信息平台2022-09-28发布2022-11-01实施

1T/SDNY036—2022目次前言..................................................................................II1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14第一法检测卡（试纸条）法...........................................................14.1原理............................................................................14.2试剂或材料......................................................................14.3仪器和设备......................................................................24.4分析步骤........................................................................24.5结果判定........................................................................35第二法光热读卡仪法.................................................................45.1原理............................................................................45.2试剂与材料......................................................................45.3仪器和设备......................................................................45.4分析步骤........................................................................45.5结果的表述计算..................................................................56性能指标............................................................................56.1检出限..........................................................................56.2灵敏度..........................................................................56.3特异性..........................................................................56.4假阴性率........................................................................56.5假阳性率........................................................................57其它................................................................................6附录A（资料性）腐霉利中英文名称、CAS号及分子式信息..................................7附录B（资料性）快速检测方法性能指标计算方法..........................................8全国团体标准信息平台I

2T/SDNY036—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省农药检定所提出。本文件由山东省农药行业协会归口。本文件起草单位：山东省农药检定所、山东师范大学、山东省现代农业化学产业技术研究院、聊城市产品质量监督检验所。本文件主要起草人：张耀中、张震、于淼、吴新、周力、韩帅兵、马腾、邢冰寒、薛雯、王海燕、宿培萌、宋朋、马明、王方、张萍、张保建。本标准首次发布日期：2022年9月28日。全国团体标准信息平台II

3T/SDNY036—2022韭菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法1范围本文件规定了蔬菜中腐霉利胶体金免疫层析法。本文件适用于韭菜中腐霉利的快速测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4第一法检测卡（试纸条）法4.1原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的腐霉利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中待测组分进行定性判定。4.2试剂或材料4.2.1试剂4.2.1.1甲醇（CH3OH，CAS号：65-56-1）。4.2.1.2氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。4.2.1.3氯化钾（KCl，CAS号：7447-40-7）。4.2.1.4磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS号：7778-77-0）。4.2.1.5十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O，CAS号：10039-32-4）。4.2.1.6水（H2O，CAS号：7732-18-5，GB/T6682，三级）。4.2.2全国团体标准信息平台标准品腐霉利标准品：纯度≥95%，化合物中英文名称及CAS号等信息参照附录A。4.2.3溶液配制1

4T/SDNY036—20224.2.3.1磷酸盐缓冲液（20mmol/L，pH=7.4）：分别称取16.0g氯化钠、0.4g氯化钾、0.4g磷酸二氢钾、5.8g十二水合磷酸氢二钠，于1000mL烧杯中，加水充分搅拌溶解后，转移定容至1000mL。4.2.3.2甲醇磷酸盐（1+9）溶液：准确量取10mL甲醇，加入90mL磷酸盐缓冲液（4.2.3.1）中，混匀。4.2.4标准溶液配制4.2.4.1标准储备液（1000mg/L）：准确称取腐霉利标准品约10mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解，定容至10mL，避光-18°C及以下条件保存，有效期为12个月。4.2.4.2标准中间液（100mg/L）：准确吸取一定量标准储备溶液（4.2.4.1），用甲醇稀释，定容至10mL，避光-18°C及以下条件保存，有效期为1个月。4.2.4.3标准工作液（10mg/L）：准确吸取一定量标准中间液（4.2.4.2），用甲醇稀释，定容至10mL，0°C~5°C冷藏避光保存，有效期为2~3周。4.2.5材料腐霉利胶体金免疫层析试剂盒/检测卡（条）。4.3仪器和设备4.3.1电子天平：感量为0.01g和0.01mg。4.3.2组织粉碎机。4.3.3涡旋混合器。4.3.4移液器：量程分别为100μL、200μL、1mL和5mL。4.3.5离心机：转速≥4000r/min。4.4分析步骤4.4.1试样制备韭菜样品取样部位按GB2763的规定执行，将适量（约200g）待测样品切碎混匀均一化制成匀浆，-18℃及以下条件保存。4.4.2试样提取准确称取制备后试样2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入3mL甲醇磷酸盐（1+9）溶液（4.2.3.2），涡旋振荡1min，4000r/min室温离心2min，取上清液即为待测液。4.4.3测定步骤吸取120μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5～8次至微孔的颗粒完全溶解，室温孵育3min~5min。将试纸条插入金标微孔中反应8min。从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的样品垫，观察显色情况，进行结果判定。4.4.4质控试验4.4.4全国团体标准信息平台.1每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。4.4.4.2空白试验：称取空白试样，按照4.4.2和4.4.3步骤与样品同法操作。4.4.4.3加标质控试验：准确称取空白试样2g（精确至0.01g）置于15mL离心管中，加入40μL腐霉利标准工作液（4.2.4.3），使韭菜中腐霉利浓度为0.2mg/kg，充分混合静置30min，按照4.4.2和4.4.3步骤与样品同法操作。2

5T/SDNY036—20224.5结果判定4.5.1目视比色法4.5.1.1方法提要通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视结果示意图见图1。4.5.1.2无效结果控制线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。4.5.1.3阳性结果控制线（C线）显色，若检测线（T线）不显色或颜色浅于控制线（C线）表示试样中含有腐霉利，且其含量高于方法检出限，判定为阳性。4.5.1.4阴性结果控制线（C线）显色，若检测线（T线）颜色深于或等于控制线（C线）表示试样中不含腐霉利，或其含量低于方法检出限，判定为阴性。图1目视法判定示意图（目视法）4.5.2目视消线法4.5.2.1方法提要通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色有无进行结果表示。目视结果示意图见图2。4.5.2.2无效结果控制线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。4.5.2.3阳性结果控制线全国团体标准信息平台（C线）显色，检测线（T线）不显色，表示试样中含有腐霉利且其含量高于方法检出限，判定为阳性。4.5.2.4阴性结果3

6T/SDNY036—2022控制线（C线）和检测线（T线）均显色，表示试样中不含腐霉利或其含量低于方法检出限，判定为阴性。图2目视判定示意图（消线法）4.5.3质控试验结果空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控实验要求，该批样品结果无效。5第二法光热读卡仪法5.1原理本方法采用胶体金光热效应原理。样品中的腐霉利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，胶体金在532nm的激光照射下，表面等离子体共振效应，将吸收的光能转化成热能，从而使温度升高。通过检测线（T线）与控制线（C线）的温度变化比较，对样品中的待测组分进行定性判定。5.2试剂与材料同5。5.3仪器和设备5.3.1光热读卡仪。5.3.2除光热读卡仪外，其他仪器设备同4.3。5.4分析步骤5.4.1全国团体标准信息平台试样制备同4.4.1。5.4.2试样提取同4.4.2。4

7T/SDNY036—20225.4.3测定步骤吸取120μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5～8次至微孔的颗粒完全溶解，室温孵育3min～5min，将试纸条插入金标微孔中反应8min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端样品垫，将试纸条置入光热读卡仪，将检测线（T线）与控制线（C线）置于532nm激光下照射50s，测定检测线（T线）与控制线（C线）的温度变化值。5.4.4质控试验同4.4.4。5.5结果的表述计算5.5.1结果计算见式（1）。?�Δ?�Δ?·····················································(1)式中：ΔT——T线在激光照射前后温度的变化值；ΔC——C线在激光照射前后温度的变化值。5.5.2结果判定当T值为小于0时，表示试样中含有腐霉利且其含量高于方法检出限，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检验2次以上；当T值大于0时，表示试样中不含腐霉利或其含量低于方法检出限，判定为阴性。5.5.3质控试验结果空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控实验要求，该批样品结果无效。6性能指标6.1检出限为0.2mg/kg。6.2灵敏度应不小于95%。6.3特异性应不小于95%。6.4全国团体标准信息平台假阴性率应不大于5%。6.5假阳性率5

8T/SDNY036—2022应不大于5%。7其它当检测结果为阳性时，应使用GB2763规定方法对结果进行确认。本方法为使用者提供快速检测依据，使用者在使用生产厂家提供的配套试剂、材料和分析步骤时，应对其进行验证，满足本方法规定的各项性能指标。全国团体标准信息平台6

9T/SDNY036—2022AA附录A（资料性）腐霉利中英文名称、CAS号及分子式信息腐霉利中英文名称、CAS号及分子式信息见表A.1。表A.1腐霉利中英文名称、CAS号及分子式信息农药中文名称农药英文名称CAS号分子式腐霉利Procymidone32809-16-8C13H11Cl2NO2全国团体标准信息平台7

10T/SDNY036—2022BB附录B（资料性）快速检测方法性能指标计算方法快速检测方法性能指标计算方法表B.1。表B.1快速检测方法性能指标计算方法c检测结果总数a,b样品情况阳性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2显著性差异（2）2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%d（N11+N22）/(N1.+N2.)a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。c为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。全国团体标准信息平台8