微生物检验支原体及检验

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1、第二十九章　支原体及检验本章考点：1.概述（1）概念（2）分类与命名（3）生物学特性（4）微生物学检验2.肺炎支原体（1）生物学特性（2）致病性（3）微生物学检验3.解脲脲原体（1）生物学特性（2）致病性（3）微生物学检验4.其他支原体简介　　一、概述　　支原体是一类①无细胞壁，②呈高度多形态性，③能通过除菌滤器，在④人工培养基上能生长繁殖的⑤最小原核型微生物。　　（一）分类与命名　　支原体种类繁多，分布广泛。支原体科分为支原体和脲原体两个属。在支原体属中，对人有致病性的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体、穿透支原体等；而

2、脲原体属中解脲脲原体（也称溶脲脲原体）对人致病。　　（二）生物学特性　　1.形态与结构：支原体个体微小，大小约0.2～0.3μm，呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。革兰染色为阴性，但不易着色，常用姬姆萨染色，呈淡紫色。　　无细胞壁仅有细胞膜是与细菌区别的主要特点。支原体的细胞膜，有外、中、内三层所组成，内外两层主要为蛋白质，中间层系脂质，其中胆固醇类含量高。凡能作用于胆固醇的物质如两性霉素B、皂甙及毛地黄甙均可破坏细胞膜致其死亡。　　2.培养特性：支原体大多数需氧或兼性厌氧，通常在含95%N2、5%C02环境中生长良好。营养

3、要求较一般细菌高，可在含牛心浸液、马血清与酵母浸液的培养基上生长。支原体与脲原体对最适pH要求不同。支原体一般在pH7.8-8.0间生长，低于7.0则死亡。　　支原体的菌落特征与细菌L型菌落极相似，37℃培养3～10天可形成直径为0.2～0.5mm大小的菌落，用低倍镜观察，菌落呈“荷包蛋”样，即中央部分较厚，不透明，向下长入培养基内，周边为一层薄薄的透明颗粒区。　　支原体有许多特性与细菌L型相似，如多形性、可通过滤菌器、对低渗敏感、菌落呈“荷包蛋”样。两者不同点在于细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下，易返祖为原菌，而支原体为独立的

4、一类微生物，不出现返祖现象。　　3.生化反应：常以发酵葡萄糖、水解精氨酸和尿素等生物学特性不同，作为初步鉴别支原体的依据。支原体葡萄糖精氨酸尿素吸附红细胞肺炎支原体+--+生殖道支原体+---人型支原体-+--穿透支原体++-+解脲脲原体--+-　　4.抗原成分：支原体的抗原性主要来自细胞膜，其外层蛋白质是主要的型特异性抗原，具有免疫原性。生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）利用针对此抗原的型特异性血清来抑制支原体在培养基上生长，可将支原体分成若干血清型。　　5.抵抗力：支原体对热的抵抗力一般与细菌相似。45℃经15～3

5、0分钟或55℃经5～15分钟即告死亡。支原体耐冷，不耐干燥。支原体对一些化学物质比细菌敏感，容易被重金属盐类、石炭酸、来苏儿等化学消毒剂灭活。　　支原体因无细胞壁，对渗透压敏感，对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等不敏感，对抑制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。　　（三）微生物检查　　由于支原体无固定形态，染色结果不易与标本中的组织碎片等杂物区别，故取患者标本直接镜检对各种支原体的诊断意义不大。微生物学检验方法主要靠分离培养与血清学检查。　　二、肺炎支原体　　（一）生物学特性　　菌体呈短细丝状。长约2～5μm，

6、典型的形态类似酒瓶状。姬姆萨染色呈淡紫色。分离培养的最适pH为7.6～8.0。P1蛋白是肺炎支原体的主要特异性免疫原，是目前血清学诊断的主要抗原。　　（二）致病性　　肺炎支原体可从口腔、呼吸道分离到，主要通过飞沫传播，是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。儿童和青年易感，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染。病理变化主要是间质性肺炎、急性细支气管炎。还可引起肺外并发症。　　（三）微生物学检验　　采集咽分泌物、痰、支气管分泌物、胸水等。　　1.分离与鉴定：这是确诊支原体感染的可靠方法之一。常以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新

7、鲜酵母浸液制成液体或固体培养基。初次分离生长缓慢，通常先将标本接种于液体培养基中增菌，1周后培养基指示剂颜色改变，液体清晰，可转种于固体平板培养基，在5%C02环境中培养，初次分离肺炎支原体需1～2周才长菌落。菌落常不出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌落开始典型。肺炎支原体分离培养有时需20天或更长时间，对临床快速诊断意义不大。　　支原体在固体培养基上长出典型菌落，以此可初步诊断，再进一步进行生化反应和血清学鉴定。生化反应如：　　（1）葡萄糖、精氨酸、尿素分解试验：发酵葡萄糖产酸，不能利用精氨酸、尿素。　　（2）氯化三苯基四氮唑

8、（TTC）还原试验：使无色TTC还原为粉红色。　　（3）生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）。抗血清。　　（4）红细胞吸附试验；肺炎支原体的菌落能发生红细胞吸附。　　2.血清学试验　　（1）特异性血清学试验（临床少用）　　1）ELISA技