细胞重组与细胞融合医学ppt

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1、细胞重组与细胞融合一、细胞重组二、细胞融合一、细胞重组（一）概述1概念通过一定的实验技术，从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组，使其装配成具有生物活性的细胞或细胞器，又称细胞拆合。2特点细胞重组最初只在细胞核、质之间的移植，现在发展到可以人为的对细胞任何的不同组分进行组合，大大扩展了在细胞工程研究中的应用。3意义1）研究核质关系2）研究细胞器的功能及相互作用关系3）研究细胞器的组装，甚至细胞的自我装配机理，以揭示细胞起源与进化的机制。4）结合基因转移技术，可人为地使细胞表达新的性状和产生新的产物，实现掌握细

2、胞、利用细胞、改造并进而创造出具有特定性状和功能的工程细胞。（二）细胞重组技术★细胞重组的方式及有关概念1）胞质体与完整细胞的融合形成胞质杂种；2）微细胞与完整细胞的融合形成微细胞异核体；3）胞质体与核体（小细胞）融合形成重组细胞（核质杂种）胞质体（cytoplast,cytosome)：除去细胞核后由细胞膜包裹的结构。小细胞（minicell）：又称核体，具有细胞核、带有薄层细胞质。微细胞（microcell）：含有一个微核（仅有一条或几条染色体）并带有薄层细胞质。1显微操作技术在显微镜下或借助于显微操作仪，用细微玻璃针或微吸管、微电极等对细胞进行人为操作。

3、2细胞分离技术1）梯度沉降分离法2）等密度沉降分离法3）流式细胞仪分离法3细胞破碎方法1）超声波破碎法2）反复冻溶法3）化学裂解法4）高速组织倒碎法4细胞器的分离5胞质体、核体和微细胞的制备最常使用方法是：物理法结合显微操作技术化学法结合离心技术制备1）胞质体首先用细胞松弛素B处理细胞诱发其排核，然后震荡离心分离得到胞质体。2）核体在得到胞质体的同时，离心收集排除的有完整细胞核，带有少量细胞质并围有完整细胞膜的结构便是核体。3）微细胞首先用秋水仙素处理，染色体停滞在有丝分裂中期，体外培养过程中，在单个染色体或染色体周缘会重现核膜而形成含有一个微核、一薄层细胞质

4、和一个完整质膜的微细胞。6细胞器拆合重组举例细胞器的移植主要是指叶绿体和线粒体的移植。如卡尔森用白化型原生质体摄取正常的叶绿体，进而发育成正常的绿色植物；或有人用抗药型草履虫的线粒体植入敏感的草履虫细胞，使后者获得抗药性等。二、细胞融合(cellfusion)（一）、细胞融合的概念用人工方法把同种或不同种的两个或两个以上的细胞，通过介导物作用，融合成一个细胞的技术。亦称体细胞杂交（somatichybridization）（二）、细胞融合的意义（应用）1进行基因定位，绘制人类基因图基因定位的方法家系分析法细胞融合法基因剂量效应法重组DNA法分子杂交法限制性片段

5、长度多态性技术脉冲电泳法（PEGE）基因图：指将人类染色体上所有基因按其具体位置、次序和间隔距离详细地排列而成的图，又叫染色体连锁图2诱导PC染色体3体细胞杂种的致瘤性分析4遗传缺陷的基因互补5分化功能表达调控的研究6淋巴细胞杂交瘤技术与单克隆抗体☆由单个杂交瘤细胞增殖产生的克隆细胞群分泌的高度纯一的抗体称为单克隆抗体7植物细胞的原生质体融合培育杂种植株8核质相互作用关系9基因治疗10疾病诊断（三）、细胞融合的机理膜融合是两个不同的膜相互接触和融合，导致两膜脂和膜蛋白的相互混合及两侧内含物的混合。细胞融合的基本步骤包括：1细胞密切靠近2细胞桥形成3细胞质渗透4

6、细胞核融合★融合机制种种1）“脂无序”模型Lucy，1970-19752）Ca2+诱导的侧向“相分离”模型Papahadjopoulos19783）六角形HII构象与膜融合CullisandHope19784）Ca2+诱导局部脱水与膜融合WilschutandHoekstra19845）渗透模型与膜融合Lucy19866）质子泵驱动膜融合刘树森1986膜融合过程大体概括为两大阶段：首先是两膜脂相互聚合和接触，其次是接触部位的局部脱水，形成不稳定中间结构，使膜脂发生混合而最终导致膜的融合（四）、细胞融合的材料1植物或微生物原生质体的制备2动物单个细胞的获得酶解消

7、化法（胰蛋白酶、胶原酶）（五）、细胞融合的方法1、生物法——病毒诱导细胞融合仙台病毒（Sendalvirus）又称日本血凝性病毒（HVJ），是一种RNA病毒，1962年冈田善雄发现，能引起艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞。引起细胞融合的有效部位在于它的细胞膜成分，特别是磷脂成分，而与核酸活性无关。2、化学法——PEG结合高Ca2+、pH诱导法1）高级脂肪酸衍生物2）脂质体3）钙离子4）水溶性高分子化合物—聚乙二醇（PEG）最为常用5）水溶性蛋白质和多肽（如牛血清蛋白）20世纪70年代，华裔加籍科学家高国楠发现PEG能促进植物原生质体融合，开辟了植物细胞融合的研究。

8、目前化学法主要包括：NaNO3诱导、高