2021常规病理技术（全文）

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2021常规病理技术（全文）知识点1:对送检组织标本的要求送检组织标本在手术切除或活检后应当立即放入4%中性缓冲甲醛溶液中固定。尸检标本应当尽量在死亡后尽早取材固定。送检组织需要全部取材的,应当在送检单上注明,有特殊要求（如细菌培养、解释道化学分析等）应当事先联系,并且在标本未固定前进行处理。知识点2:组织取材要求在对送检组织标本进行详细检查的基础上,根据诊断的需要,确定取材的部位和块数。切取的组织应当按照不同的部位分别给予不同的编号或标记,以便镜检时核对。另外,尽可能在取材前对有意义的标本的表面及剖面镜下摄影,并编号存档。知识点3:组织标本大小组织标本大小见表类别标本大小一般标本的组织块以1.5cmx1.5cmx厚（020.3）cm为宜免疫组织化学染色的组织块以!.0cmxLOcmx厚0.2cm为宜

1原则上,应当尽快取材,但对于外科手术切除标本较大,如胃、肺、肠等器官,一般最好先固定再取材。知识点5:小标本的处理方式由于在胃镜下取的样本和各种穿刺样本等一般组织块较小,因此应用易透水的薄纸包好,在取材时将标本染上伊红液,以免在包埋过程中丢失。知识点6:成年人尸检组织取材部位和组织块数成年人尸检组织取材部位和组织块数见表器官组织取材部位和组织块数肝右叶1块,切成正方形,左叶1块,切成长方形脾1-2块肾右肾1块,切成正方形,左肾1块,切成长方形,都包括皮、髓质和肾盂胰1块肺右下叶1块,切成正方形,左下叶1块切成长方形心和大血管左心室、右心室各ー块,主动脉1块,可距主动脉瓣5cm处取材肾上腺左、右各取1块膀胱1块消化道食管、胃窦部、小肠、小肠淋巴结核直肠各取1块胸腺1块

2皮肤1-2块骨脊椎骨1块,胸骨1块子宫宫颈1块,宫体1块睾丸或卵巢1块脑垂体1块,前叶或包括前后叶脑左侧运动区、左侧豆状核和小脑各1块知识点7:活检标本取材要求活检标本取材时,应当取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织,取材时要避免挤压组织,用的刀、剪应锋利,组织的切面应当平整,大小一般在2cmxl.5cmx0.3cmo新鲜标本的保存通常在30分钟内完成,如果要进行分子生物学检测,应当严格注意无菌和时间,以避免组织内的mRNA的降解和抗原的弥散,手术标本离体后,应立即取材,并且保存在冻存管中,进行编号,带回实验室保存在液氮或ー80て的冰箱内备用。知识点8:组织固定的目的病理学中组织固定的主要目的是保存组织形态学特征清晰和稳定,具体包括:①抑制自溶和腐败;②保存;③硬化;④胶质物体的固化;⑤肉眼鉴别;⑥对染色的影响;⑦渗透和固定。知识点9:组织的物理固定方法组织固定可通过物理方法来实现,见表内容方法

3蒸汽固定法固定组织中的可溶性成分及血液或细胞涂片可使固定加速,可以减少某些大体标本的固定时间,使组织固定时微波固定法间从12小时减少到少于20分钟将组织切成薄片,置于液氮中,水在真空室内ー40て时会被除去;冻干和冷冻置换将组织置于甲醛蒸气中做后固定注射或灌注固定法通过血管系统注射或灌注等方法进行固定知识点10:组织脱钙组织里存有钙盐可妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶,经过固定后,需要先将钙盐除去使组织软化,才能进行常规切片。如果脱钙不全,则切片容易撕开或碎裂,损伤切片刀刀刃。脱去钙盐的过程,称为脱钙。骨组织固定24小时后,锯下不超过0.5cm厚的薄骨片,以4%甲醛溶液固定后,进行脱钙。骨组织过厚则需延长脱钙时间,但长时间浸于强酸会影响切片染色效果。知识点11:组织脱钙的步骤组织脱钙的步骤见表项目内容取材骨组织固定于10%甲醛溶液24小时后再锯取厚度约0.5cm骨片固定以10%甲醛溶液固定2天脱钙将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液,直至组织软化为止除酸流水冲洗24小时脱水、浸蜡、切片进行常规脱水、透明、浸蜡、切片

4组织包埋技术知识点1:包埋的概念组织经过固定、脱水、透明和浸蜡等过程后,用包埋剂（石蜡、火棉胶、树脂等）将组织块包埋成块,使得组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却,这个程序称为包埋。知识点2:组织石蜡包埋法石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法,包埋后的组织可以长期保存。包埋的方法有包埋机包埋和手工包埋两种。知识点3:体液石蜡包埋法痰液、胃液、尿液、胸腔积液、腹水等可以行石蜡包埋。痰液应当选用含血液的部分或较为可疑的实体部分,滴上伊红后用皱纹纸包好,然后用10%的中性甲醛固定,再经常规脱水,透明、浸蜡并包埋。新鲜的胃液、尿液、胸腔积液、腹水等体液标本,倒去上层的澄清液体,将浑浊的液体放入离心管中,以转速2000-3000转每分钟离心15分钟,倒去上清液后,用10%中性甲醛固定沉淀物,然后进行脱水透明、浸蜡、包埋。知识点4:冷冻干燥包埋法新鲜组织在液氮中速冻后,先真空抽气,排除组织内的水分,然后将充分干燥的组织用甲醛蒸气固定。再将固定的组织浸入石蜡内浸蜡,最后用石蜡包埋。冷冻干燥包埋法包埋蜡块可以用于免疫荧光、免疫酶标记,也可用于放射自显影及1GSS方法。石蜡切片技术知识点1:石蜡切片技术的概念组织经石蜡包埋后制成的蜡块,用切片机制成切片的过程,称为石蜡切片技术。

5知识点2:石蜡切片技术ーー组织的取材和固定⑴取材:取材时组织块的大小厚薄应当适当,陈旧、腐败和干枯的组织不宜制作切片。⑵固定:组织固定时,固定液的量应当充足,至少要在4倍以上,同时要注意组织块不要与容器粘连。固定不及时和固定不当的组织,染色时常出现核质着色较浅,轮廓不清,以及出现不同程度的片状发白区。知识点3:石蜡切片技术ーー组织脱水、透明和浸蜡⑴脱水:组织脱水用的各级乙醇,应当保证相应浓度,以便组织脱水彻底。无水乙醇中的组织块放置时间不宜过长。脱水乙醇，特别是无水乙醇中混有水分,则组织脱水不彻底。⑵透明:二甲苯透明应当充分，否则不利于石蜡的浸透。⑶浸蜡:组织在二甲苯内的时间应当严格掌握,时间不足,则石蜡不易浸透。浸蜡的温度不宜过高,时间长短也应当加以控制。知识点4:石蜡切片困难的处理石蜡切片困难主要有两种情况:①组织太硬;②切制时组织易碎（如皮肤、骨骼或血凝块）。无论是组织切片遇到困难,还是组织未做先期的防护处理,都可以先将组织浸入香柏油中软化,然后以二甲苯洗去香柏油,重新浸蜡包埋,最后以常规方法切片。常规染色技术知识点1:苏木素一伊红染色在组织病理学中,苏木素一伊红染色是ー种日常使用最广泛的常规染色方法。常规苏木素染色的对比染色是用伊红,也有采用焰红,因为焰红比伊红色泽更鲜明,还有采用橘黄G,

6比布里希猩红,波尔多红等作为对比染色。知识点2:Harris苏木素液的配制方法Harris苏木素液的配制液见表配制液用量苏木素!g甲液无水乙醇10ml乙液硫酸钾铝20g蒸储水200ml0.5g⑴加热溶解甲液:将甲液加热溶解后,密封待用。⑵甲、乙液混合:将乙液加热溶解至沸,去火,待溶液仍处于小沸腾状态时,将甲液徐徐倾入其中,全部混合后,使溶液在短时间内加热至沸腾,去火后,将氧化汞缓慢倾入溶液中。⑶加温、冷却:液体变为深紫色后,待氧化汞全部放入再将溶液加温至沸腾片刻,立即将溶液放入流动的冷水中,连续摇晃,直至溶液完全冷却为止。⑷过滤:隔夜后过滤,加入冰醋酸（按5%比例）混匀,过滤后,保存于冰箱内备用。知识点3:Hansen苏木素液的配制方法Hansen苏木素液的配制液见表配制液m日用里苏木素ig甲液无水乙醇10ml乙液硫酸钾铝（钾明帆）20g

7蒸憎水200ml高镒酸钾ig丙液蒸憎水16ml⑴将甲液、乙液分别加热溶解,然后将甲、乙两液混合。⑵将丙液溶解后缓缓滴入,待全部混合后,再次煮沸1分钟,冷却后过滤,即可使用。知识点4:Heidenhain铁苏木素液的配制方法Heidenhain铁苏木素液的配制液见表配制液用量硫酸铁锭（紫色结晶）5g甲液蒸憎水100ml苏木素o.5g乙液无水乙醇10ml蒸憎水90ml硫酸铁锭只有紫色的透明结晶才能使用,・苏木素是溶于乙醇中后加水。苏木素液需要放置4-5周才能成熟。临用时,将甲、乙两液等量混合后使用。知识点5:伊红染色伊红是最常用的胞质染料,本身溶于醇而不溶于水,为砖红色粉末状或酱红色结晶。配方:伊红Y（水溶）0.5-lg,蒸储水99mlo如果取用伊红丫（醇溶性）应当溶于99ml75%或95%的乙醇中。如果在伊红液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色过程,使得胞质的色泽更加艳丽。知识点6:苏木素一伊红染色前的切片预处理

8苏木素一伊红染色前的切片预处理见表项目内容用甲醛固定久的组织或劣质甲醛固定的组①切片脱蜡至水脱甲醛色素织,以肝、肺等脏器易产生黑色或棕色的②Verocay液（1%氢氧化钠色素,称为甲醛色素,染色前必须脱去色1ml、80%乙醇99ml）10素,否则会影响组织形态结构观察和病理分钟③用流水冲洗5分钟诊断④常规染色脱汞盐结晶有些固定液含有氯化汞,固定的组织中易产生棕黄色结晶状汞盐沉淀,染色前必须完全清除汞盐结晶,才能进行染色①切片脱蜡至水②Lugo碘溶液浸20分钟③蒸憎水洗5分钟④95%乙醇10分钟⑤水洗1分钟⑥5%硫代硫酸钠5分钟⑦水洗,常规染色①切片脱蜡至水,浸入625%高镒酸钾13小时②水洗!分钟脱黑色素法③5%草酸30分钟④水洗1分钟⑤常规染色知识点?:人工操作苏木素一伊红染色人工操作苏木素一伊红染色的步骤和结果见表

9项目内容1）二甲苯I脱蜡!0分钟步骤2）二甲苯II脱蜡5分钟3）无水乙醇洗去二甲苯1分钟x2次4）95%乙醇1分钟5）90%乙醇1分钟6）85%乙醇1分钟7）水洗2分钟8）苏木精染色1-5分钟9）水洗1-3分钟10）1%盐酸乙醇分化20秒11）水洗5分钟,变蓝12）蒸憎水水洗1分钟13）伊红染色20秒ー5分钟14）水洗30秒15）85%乙醇脱水20秒16）90%乙醇30秒17）95%I乙醇1分钟18）95%II乙醇1分钟19）无水乙醇I2分钟20）无水乙醇II2分钟21）二甲苯I2分钟

1022）二甲苯II2分钟23）二甲苯III2分钟24）中性树胶或加拿大树胶封片结果细胞核呈蓝色,胞质、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色