放散试验课件

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放散试验原理红细胞上的抗原与血清中抗体在适合条件下发生凝集或致敏，这种结合是可逆的。如改变某些物理条件，抗体又可从结合的细胞上放散，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。这种方法常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等

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3放散试验方法放散试验的方法很多，ABO血型IgM抗体以热放散法为常用。Rh血型IgG抗体以乙醚放散法为常用。

4加热放散法试剂操作注意事项

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6加热放散法试剂抗A和抗B分型血清。2%A型和B型试剂红细胞盐水悬液。受检红细胞。

7加热放散法操作1.将受检红细胞以大量生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将盐水除尽，取压实红细胞l份，分别与2份抗A和抗B分型血清混合。置4℃lh，每隔10min将试管振摇1次，使充分混合。

8加热放散法操作2.离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤红细胞3-4次，倾去洗涤液，留取压实红细胞，加1/2容积的生理盐水(如放散液不立刻进行检查，应以AB型血清代理生理盐水)，置56℃水浴中10min,每隔15s振摇l次，使吸附在红细胞上的抗体充分放散。

9加热放散法操作3.立刻以3000r/min离心，离心时套管内放温水，使温度尽量保持在56℃，分离得的上清液即为放散液。4.将放散液用2%A型和B型试剂红细胞鉴定抗体，即可检出受检红细胞的血型。

10加热放散法操作如实验的目的鉴定A亚型，则可用已知A亚型红细胞同时作放散实验，按放散液抗体的强度A1﹤A2﹤A3﹤Ax﹤Am，判定受检红细胞亚型的型别，B亚型的放散液鉴定方法相似。

11加热放散法注意事项1.为了使放散液内含有最多的抗体，吸收血清量应加大。2.放散时，应严格注意温度和时间。温度过高红细胞易溶解;温度过低，抗体从红细胞上放散不完全。3.直接抗人球蛋白试验阳性的红细胞，如新生儿溶血病患儿或自身免疫性溶血性贫血患者，经洗涤后即可作抗体放散试验。4.放散液中抗体易变性，故应立刻进行鉴定。若需保存，应将抗体放散于选定的AB型血清或牛白蛋白液中。

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13乙醚放散法试剂操作特点

14乙醚放散法试剂受检者血清相应抗原的红细胞(抗凝血)乙醚（分析试剂）AB血清

15乙醚放散法操作取具有相应抗抗原的抗凝血，离心后吸去血浆，加大量生理盐水，洗涤1次，离心，取压实红细胞备用。取受检者血清5ml，加压实红细胞1ml，混匀后放在适当温度中1小时，在此期间要摇匀1-2次。离心。离心后取出，将上清液吸出另放1管，鉴定上清液中的抗体。

16乙醚放散法操作将红细胞用盐水洗涤3次，离心压实红细胞。取1体积压实红细胞，加1体积AB型血清或生理盐水和2体积乙醚，颠倒摇匀10min，然后以3000r/min离心5min.离心后即分成3层，最上层是乙醚，中层是细胞基质，下层是具有抗体的放散液，其色深红。

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18乙醚放散法操作用清洁的吸管吸出放散液，若有混浊，可再离心1次。将放散液放置37℃水浴中30min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。

19乙醚放散法特点本试验适用于鉴定Rh抗体。最大优点用于检查获得性溶血性贫血，此种患者的红细胞为直接抗人球蛋白试验阳性，说明在体内已有自身抗体吸附在红细胞上。这种抗体常常有Rh特异性。

20谢谢!