放散试验操作规程.doc

《放散试验操作规程.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、放散试验操作规程1.目的常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等。2.适用范围ABO亚型的鉴定及新生儿溶血病的诊断。3.职责3.1检测者职责：负责血液标本的处理、交叉配血试验操作及相关记录；3.2复核者职责：负责对血液标本的检测过程以及关键控制点进行审核，校对试验结果和检测报告。4.原理红细胞上的抗原与血清中的抗体在适合条件下发生凝集或致敏。这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件，抗体又可从结合的红细胞上放散出，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。这种方法常用于ABO亚型的鉴定、全凝集

2、或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等。放散试验的方法很多,ABO血型，IgM抗体以热放散法为常用。Rh血型，IgG抗体以乙醚放散法为常用。5.设备、材料和试剂5.1设备细胞洗涤离心机编号/型号：132/KA-2200、台式离心机编号/型号：287-1/TD4、显微镜编号/型号：77/IM、数显恒温水浴锅编号/型号：264/HH-2、循环恒温水浴箱编号/型号：283/HH-6。5.2材料5.2.1送检标本要求静脉采集至少为抗凝血5ml；5.2.2标本处理：标本的验收、标识、存放、贮存、销毁等处理按《标本采集、接收及处理操作规程》进行。5.3试剂相应的血清抗体、

3、A型和B型试剂红细胞（3-5%）盐水悬液、乙醚(分析试剂)6.检测环境试剂与标本贮存环境：4℃冰箱检测环境：室温、37℃、56℃7.步骤与方法7.1加热放散法7.1.1将受检红细胞以大量生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将盐水除尽，取压积红细胞一份，分别与2份抗A和抗B型分型血清混合，置4℃冰箱1小时，每隔10分钟将试管振摇1次，使充分混合；7.1.2离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤红细胞3-4次，倾去洗涤液，留取压积红细胞。加1/2容积的生理盐水(如放散液不立刻进行检查，应以AB型血清代替生理盐水)。置56℃水浴中10分钟，每隔1分钟振摇1次，使吸附在红细胞上的抗体充分放散出；7

4、.1.3立刻以1000g离心1分钟，离心时管内放温水，使温度尽量保持在56℃，分离得到的上清即为放散液；7.1.4将放散液用A型和B型试剂红细胞（3-5%）鉴定抗体，即可检出受检红细胞血型。7.1.5结果判定放散液和A型红细胞凝集与B型红细胞不凝集，被检血型为A型；反之为B型。放散液和A型与B型红细胞均凝集，被检血型为AB；如均不凝集为O型。7.1.6附注为了使放散液内有最多的抗体，吸收血清量应加大。放散时应严格注意温度和时间。温度过高，红细胞易溶解；温度过低，抗体从红细胞上放散不完全。直接抗球蛋白试验阳性的红细胞，如新生儿溶血病患儿或自身免疫性溶血性贫血受血者，经洗涤后即可做

5、抗体释放试验。放散液中抗体易变性，故应立刻进行鉴定。若要保存，应将抗体放散液于选定的AB型血清中。7.2乙醚放散法7.2.1取具有相应抗原的抗凝血，离心后吸去血浆，加大量生理盐水，洗涤1次，离心，取压积红细胞备用；7.2.2受检者血清5ml，加压积红细胞lml，混匀后放在适当的温度中1小时，在此期间要摇匀1-2次；7.2.3取出后离心，将上清液吸出放到另一管中，鉴定上清液的抗体。将红细胞用盐水洗涤3次，离心压积；7.2.4取1体积压积红细胞加1体积AB型血清或生理盐水，2体积乙醚，颠倒摇匀10分钟，然后以1000g离心5分钟；7.2.5离心后即分为三层，最上层是乙醚，中层是红细

6、胞基质，下层是具有抗体的放散液，其色深红；7.2.6用清洁的吸管吸出放散液。若有浑浊，再离心一次；7.2.7将放散液放置37℃水浴中30分钟，除尽乙醚，然后鉴定抗体；7.2.8结果判定以Rh血型抗体抗D为例，放散液(用酶法或聚凝胺法)和下列红细胞的反应CcdEE型红细胞不凝集，CCDeeccDEEccDee型红细胞均发生凝集，证明该放散液中含IgG抗D抗体。本试验适用于鉴定Rh抗体。最大优点用于检查获得性溶血性贫血，此种受血者的红细胞为直接抗球蛋白试验阳性，说明在体内己有自身抗体吸附在红细胞上，这种抗体多有Rh特异性。