发酵工程菌种保藏课件

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菌种的保藏

1（1）菌种保藏的目的及原理（2）菌种保藏的方法（3）注意事项

2㈠菌种保藏的目的及原理菌种保藏是保证生产菌种质量的重要环节，其目的在于不污染杂菌，使退化和死亡降低到最低限度，尽可能使菌种保持原来的优良性状。基本原理：根据菌种的生理、生化特性，人为的创造条件，使微生物的代谢处于不活泼、生长繁殖受到抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。

3保藏时一般利用菌种的休眠体（孢子、芽孢等）并创造有利于休眠状态的环境条件，如降低培养基营养成分、低温、干燥、缺氧和添加保护剂等，使菌种的代谢活性处于最低状态，以达到防止菌种退化、死亡的目的。

4㈡常用的保藏方法1、斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏。此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。

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63、沙土管保藏法菌种沙土管保藏法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，有的微生物可保藏10年。保藏效果较好，且微生物转接方便，经济简便。

74、悬液保藏法悬液保藏法的基本原理是寡营养保藏，是将微生物混悬于不含养分的媒液中加以保藏的方法。此法适用于大部分的放线菌，酵母菌，霉菌以及肠道科细菌等，其关键在于试管口必须防水密封，一般可保藏1年左右。

85、真空冷冻干燥保藏法此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。

96、低温保藏法低温保藏法又叫冷冻保藏，是普通的保藏技术。此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。

107、液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。此法操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上，是目前被公认的最有效的菌种长期保藏技术之一。除了少数对低温损伤敏感的微生物外，该法适用于各种微生物菌种的保藏。优点是可使用各种培养形式的微生物进行保藏，无论是孢子或菌体、液体培养物或固体培养物均可采用该保藏法。其缺点是需购置超低温液氮设备，且液氮消耗较多，操作费用较高。

11㈢菌种保藏注意事项1、注意选择适当的保藏方法；2、采用良好的培养基新鲜培育出来的菌种进行保藏，要求菌体健壮或孢子丰满，种龄要适宜，细菌要求在稳定期；3、必须进行严格的无菌操作，注意维持菌种的活性；4、保藏期间，严格防止杂菌污染，为菌种创造最适宜的保藏条件，如控制保藏温度等；5、严格控制传代的次数，采用斜面低温保藏时尤其注意这点；6、保藏菌种恢复培养时，要转接到保藏以前所用的同一代培养基上进行培养，以维持优良性能的稳定性。