微免实验课件

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资源描述:

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吞噬作用

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3细胞免疫功能检测

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6沉淀反应可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在下,若二者相遇比例适当,可形成肉眼客观的沉淀物或沉淀线。

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8标本1标本2阴性对照阳性对照

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11对流免疫电泳-AgAbAgAb+4~5mm>1.5cm4~5mm阳性阴性标1阳性标2阴性结果判断:阳性对照和抗体孔之间出现白色沉淀线阴性对照和抗体孔之间无白色沉淀线标本1和抗体孔之间?标本2和抗体孔之间?

12凝集实验颗粒性抗原(红细胞、细菌等)与相应抗体结合,在适当的电解质环境中,形成大小不等的凝集块。直接凝集反应:颗粒性抗原间接凝集反应:可溶性抗原+载(红细胞、乳胶颗粒、活性炭)间接凝集抑制反应

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14肥达反应—辅助诊断肠热症(伤寒和副伤寒)原理:用已知伤寒沙门菌O抗原、伤寒沙门菌H抗原,甲型副伤寒沙门菌H抗原以及乙型副伤寒沙门菌H抗原,分别与待检血清做试管凝集反应,测定待检血清中有无相应抗体及其效价。

15实验方法:1.取6支试管横向排列于试管架上;2.按倍比稀释法,依次加入:单位(ml)操作:肥达反应123456生理盐水0.50.50.50.50.50.5待检血清0.50.50.50.50.5/吹打3次弃去0.5菌液0.50.50.50.50.50.5从最后一管向前加,由低浓度到高浓度血清稀释度1:401:801:1601:3201:640对照3.在第一管贴上标签,摇匀,41℃水浴2h,观察结果。*吸管:拔掉乳胶头置于桶内乳胶头:置于小篓试管:置于锅内

16操作:肥达反应注意事项:1.加液顺序:生理盐水、血清、菌液,每人取吸管一支,先吸生理盐水再吸血清,吸过血清的吸管不可再吸生理盐水;血清只取1次,0.5ml加至第一管;2.菌液从最后一管开始由后向前加,尽量不要接触到血清;3.标签贴在第1根试管上,写姓名和抗原,不要贴到试管架上;4.弃试管和吸管时动作要轻,以免破碎,红色乳胶头中不要与黄色橡皮管分离。

17操作:肥达反应结果判断:主要观察指标:(1)凝集块(2)上清透明度。-:与对照管相似,无凝集块,上清液均匀混浊;+:仅有少量凝集块,上清液较混浊;++:可见凝集块沉淀于试管底,上清液半混浊半澄清;+++:有明显可见的凝集块,上清液仅轻度混浊;++++:细菌全部凝集,有大片状,边缘不整齐的凝集块,上清液完全清亮。注意:观察前切勿摇动试管;观察顺序:先看对照管,再看第1管,第2管…;先看管底和上清,再轻轻摇动;比较O和H形成凝集块的不同。

18操作:肥达反应诊断意义:正常值:由于隐性感染或预防接种,血清中通常含有一定水平的抗体,一般以O≥1:80、H≥1:160、H甲或H乙≥1:80才有诊断意义。O抗体与H抗体的性质:O抗体—IgM,出现早,维持时间较短(数月);H抗体—IgG,出现晚,维持时间较长(数年)。

19O、H高于正常值O、H不高O高H不高感染早期或交叉反应O不高H高感染晚期、预防接种或非特异性回忆反应类别凝集效价诊断意义O抗体与H抗体的诊断意义:感染可能性大感染可能性小

20细菌(革兰染色)【涂片】取载玻片接种环取混合菌液1-2环涂片(直径约1cm)自然干燥固定(通过火焰三次)【染色】结晶紫1min水洗碘液1min水洗酒精脱色30S水洗稀释复红1min水洗吸水纸印干油镜观察

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34Giemsa染色呈紫红色,比红细胞长数倍,螺旋数目少,3-10个,呈不规则弯曲,弯曲平滑大于90度。疏螺旋体属—回归热螺旋体微生物检查时取发热期的血液样本。

35密螺旋体属—梅毒螺旋体镀银染色呈棕褐色,螺旋数目多,8-14个,排列规则紧密。

36钩端螺旋体属—钩端螺旋体镀银染色呈棕褐色,一端或两端弯曲呈钩状,常呈C、S型,螺旋最为细密而规则,镜下不清楚。

37沙眼衣原体包涵体Giemsa染色眼结膜上皮细胞的胞浆近胞核处呈紫色或蓝色,帽型、桑椹型或散在的包涵体。

38培养特性:专性真核细胞内寄生和繁殖。致病性:沙眼、泌尿生殖道感染、肺炎等。发育周期与形态:原体:球形,直径0.3m,有传染性,无繁殖能力;始体:圆形或椭圆形,直径0.5-1m,较始体稍大,无传染性,以二分裂方式繁殖。衣原体chlamydia

39沙眼衣原体包涵体Giemsa染色眼结膜上皮细胞的胞浆近胞核处呈紫色或蓝色,帽型、桑椹型或散在的包涵体。

40立克次体—恙虫热立克次体Giemsa染色单核细胞的胞浆内近细胞核旁,成堆的紫红色球杆状的立克次体。

41新生隐球菌(墨汁负染)

42假丝酵母菌

43芽生孢子

44厚膜孢子

45大分生孢子

46大分生孢子

47细菌的特殊结构

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51消毒灭菌的方法物理方法:高压蒸汽灭菌(高压蒸锅等):耐高温和潮湿的物件,如培养基,生理盐水,织物,玻璃器材等干热灭菌(烤箱,160℃):玻璃器材紫外线(人工紫外灯操作台):培养基,空气过滤除菌(滤菌器):去除液体空气内细菌(不耐热液体),分离微生物或毒素

52化学消毒:化学消毒剂,如酒精,碘酒,氧化消毒剂等

53药敏试验测定细菌对药物敏感性取G+/G-菌液1环(无菌操作!)连续划线,使细菌密密涂满于平板表面均分四区,镊子灭菌后分别夹取四种抗菌药片贴于琼脂表面(注意距离)贴上标签,倒放,置37度孵箱培养18-24h,测量抑菌圈直径

54划线分离取混合菌液1环(注意无菌操作!)持接种环来回连续划线(约1/3),此为1区将平板转90度,继续连续划线(约1/3),只有开始1-2条线通过1区,此为2区再将平板转动90度,按划2区的方法划出3区贴上标签,倒放,置37度孵箱培养18-24h,观察结果123结果判断:1.三区分区明显2.充分利用平板,琼脂完整无破损3.分离得到单个菌落

55抗酸染色(结核杆菌)石炭酸复红加入涂片间隙加热5分钟,勿持续加热冷却5分钟水洗盐酸酒精2-3滴脱色30S,轻轻晃动玻片重复脱色一次至涂片无色水洗加入吕氏美兰1滴复染1分钟水洗吸干,油镜观察

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57光滑型菌落粗糙型菌落菌落变异(S→R变异)

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59支原体典型菌落:中心厚,向下长入培养基,周边薄而透明,“油煎蛋状”菌落。

60正常细胞:排列紧密而有规则。病变细胞:细胞皱缩、脱落、出现空泡、肿胀融合。

61狂犬病毒包涵体(内基小体)

62沉淀生长混浊生长表面生长细菌的生长现象液体培养基:

63半固体培养基:细菌的生长现象混浊生长有鞭毛细菌观察细菌的动力无鞭毛细菌线状生长

64培养基

65白喉棒状杆菌培养特性:在亚碲酸钾血琼脂平板(鉴别选择培养基)上生长,能吸收碲盐还原为元素碲,使菌落呈黑色。亚碲酸钾血琼脂平板

66亚碲酸鉀的血平板

67毒力检测:Elek平板白喉棒状杆菌在琼脂平板中央贴一条浸有白喉抗毒素的滤纸条,垂直接种待检菌,培养48h,观察有无白色沉淀线形成。Elek平板

68培养特性:可在普通琼脂培养基上生长,形成灰白色粗糙型菌落,低倍镜下可见卷发状边缘。炭疽芽胞杆菌

69肠道非致病菌分解乳糖产酸,菌落呈红色,较大。肠道致病菌不分解乳糖,呈半透明的淡黄色菌落,较小。示教SS培养基(肠道菌的选择鉴别培养基)

70大肠杆菌在SS平板上(棕红色,发酵).伤寒杆菌在SS平板上(淡黄色,不发酵)

71双糖铁培养基成分:乳糖硫酸亚铁酚红(酸黄碱红)葡萄糖上层(固体斜面)下层(半固体)分解乳糖、H2S分解葡萄糖、动力

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73金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌

74白色葡萄球菌(呈白色)金黃色葡萄球菌

75肺炎双球菌(草绿色溶血环,自溶).

76甲型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌

77甲型溶血乙型溶血

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79丙型溶血性鏈球菌甲型溶血性链球菌(草绿色溶血环,无自溶)

80破伤风梭菌

81产气荚膜梭菌血琼脂平板上:双层溶血环(θ、α毒素),“靶样溶血”血平板(双层溶血环)

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83庖肉培养基(淡红/肉红色)牛乳培养基-汹涌发酵

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86结核杆菌:罗氏培养基

87酵母型菌落

88类酵母型菌落

89细菌的生化反应各种细菌所具有的酶不同,对营养物质的分解能力也不同,因而可利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物(酸碱、气)、代谢方式和条件等,以此来鉴别细菌的类别、种属。常用酸碱指示剂:

90☞指示剂为酚红㊉+---糖发酵实验产酸产气:指示剂变色,小倒管内有气泡;以表示产酸:指示剂变色,以+表示不分解糖:指示剂不变色,以-表示㊉

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922.硫化氢试验某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸(如胱氨酸),产生硫化氢,硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。-:不变色+:黑色-+

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943.靛基质试验(吲哚试验)某些细菌能够分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基质(吲哚),靛基质本身无色,但加入对二甲基氨基苯甲醛(吲哚试剂)作用后形成玫瑰红色的靛基质。-:黄色+:红色

954.尿素酶试验有些细菌具有尿素酶,能分解尿素形成大量的氨,使培养基PH上升呈碱性,使指示剂变色。☞指示剂为酚红-:淡红色+:深红色

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97细菌生化微量反应管:☞指示剂为溴甲酚紫-:紫色+:黄色+-示教

98肠道杆菌生化反应表

99免疫标记技术常用的标记物有哪些:酶、荧光素、放射性同位素、电子致密物质、胶体金等病毒培养有哪些方法细胞培养动物接种法病毒鸡胚接种培养法

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