南医大微免实验六.ppt

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1、微生物与免疫学实验（六）主要内容一、操作：肥达试验二、示教：肠道杆菌霍乱弧菌炭疽杆菌厌氧性细菌肥达试验原理：用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。操作：肥达试验（试管凝集反应）器材：试管6支/人，试管架1个/4人吸管1支/人，标签1个/人已知：伤寒H抗原、O抗原（4人/组）甲型副伤寒H抗原乙型副伤寒H抗原待检：病人血清（1:10稀释）0.5ml生理盐水1234560.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.

2、5ml0.5ml血清1：401：801：1601：3201：640对照加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5h，观察结果肠道杆菌（G—）肠道杆菌的鉴定标本增菌培养接种SS平板双糖铁培养基初步鉴定其他生化反应鉴定血清学鉴定有菌可疑的乳白色菌落SS培养基胆盐枸橼酸盐煌绿乳糖蛋白胨中性红抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱酸：红碱：黄双糖铁培养基上层（固体）下层（半固体）乳糖硫酸亚铁酚红葡萄糖生化反应表葡乳麦甘蔗H2S尿素靛大肠---痢疾------伤寒--/+--变形-----炭疽杆菌：G＋粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，

3、芽胞呈椭圆形，位于菌体中央30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状炭疽杆菌培养物霍乱弧菌：G-，一个弯曲厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌肉毒梭菌产气荚膜梭菌破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验肉毒梭菌：庖肉培养基第6管均匀混浊＋少量凝集＋＋细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集呈颗粒状＋＋＋大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大＋＋＋＋全部凝集，液体澄清，大片凝集块以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价O达到1:80，H达到1:160H甲或H乙达

4、到1:80或以上有诊断意义结果判断血清稀释度菌液1：401：801：1601：3201：640效价伤寒H伤寒O甲副H乙副H记录结果*吸管放桶，试管放锅实验报告示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌肥达试验：原理、步骤、结果、分析