南医大微免实验三.ppt

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1、微生物与免疫学实验（三）血清学反应（二）：录像：免疫标记技术操作：ELISA示教：免疫荧光（C301）细菌学总论：细菌基本形态、特殊结构操作：革兰染色（三）补体结合试验方法：待检系统：Ag（未知）+Ab（已知）+补体指示系统：绵羊红细胞（Ag）＋溶血素（Ab）结果：溶血——阴性不溶血——阳性（四）中和反应（neutralization）病毒中和试验毒素中和试验（五）免疫标记技术将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。免疫荧光技术（荧光抗体技术）【原理】是在免疫学

2、、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。【方法】主要有直接法和间接法。免疫荧光酶联免疫吸附试验（ELISA）（EnzymelinkedlmmunosorbentAssay）【原理】把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇

3、到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。【方法】主要有间接法和双抗体夹心法。ELISA：间接法------用于测定抗体ELISA：双抗体夹心法------用于测定抗原ELISA：双抗体夹心法检测尿HCG器材：1个小杯/人，标本1、标本2A、B、C液方法：小杯内加标本两滴甩干、水洗三次加一滴C液（红色）甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白纸上，观察结果结果判断：蓝色为阳性*瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！5min5min细菌总论（一）革兰染色法：1884年Gram创建，是细菌学中最为经典的染色法。意义：对细菌鉴别、选择抗菌药

4、物、研究细菌致病性等有重要意义。原理：与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。细菌的基本形态细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（µm）作为测量单位。细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1µm，杆菌长2∼5µm，宽0.3∼1µm。球菌（coccus）杆菌（bacillus）螺形菌（spiralbacterium）弧菌：一个弯曲螺菌：多个弯曲细菌的特殊结构荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛荚膜（Capsule）鞭毛（flagellum）芽胞（spore）革兰染色操作步骤【涂片】取载玻片接种环取混合菌液1-2环涂片（直径约1cm）自然干燥固定（

5、通过火焰三次）【染色】结晶紫1min水洗碘液1min水洗酒精脱色30S水洗稀释复红1min水洗吸水纸印干油镜观察*注意无菌操作！有菌玻片放在水池旁玻片缸内!作业：1、作图—细菌基本形态、特殊结构2、ELISA：原理、方法、结果、结论3、革兰染色：方法、结果（图示）作图请注意大小比例、标注