实验2紫外性能和实验3奎尼丁荧..课件

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上次实验情况优点：大部分同学做得较好，部分同学能将相应计算软件应用于实验报告中，并进行对照分析，有创新性，值得表扬。存在问题：对0.1mol/L氢氧化钠标准液浓度的认识问题（4位有效数字）磷酸溶液浓度以第1或第2突跃点计算；分段计算不合适，引入误差较大。浓度计算公式未写，只是1个结果数据。手动电位滴定表格画得不正确，等当点体积计算错误;滴定管读数不正确，应读取小数后2位。药物分析Ⅰ（仪器分析）

1实验二、分光光度计的性能检查实验三、荧光法测定硫酸奎尼丁含量本次实验内容

2实验二、分光光度计的性能检查实验目的掌握紫外分光光度仪的性能测试内容及测定方法（中国药典方法）；熟悉紫外分光光度仪的操作方法；了解紫外分光光度仪的构造原理。仪器北京普析1901；北京普析1810；日本日立3010；日本分光V550。

3中国药典对紫外仪的性能测试要求：波长精度（氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正）吸收度准确性——用重铬酸钾的硫酸溶液检定杂散光检查——指一些不在谱带范围内且与所需波长较远的光（来源于仪器的瑕疵和使用保养不善）。用碘化钠和亚硝酸钠溶液检定

4实验内容吸收度的准确度：取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg(实际50.0mg)，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000mL，在规定的波长处测定（先进行扫描得到波峰和波谷的波长），计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。波长/nm235/最小257/最大313/最小350/最大规定值许可范围124.5123.0～126.0144.0142.8～146.248.647.0～50.3106.6105.5～108.5

5杂散光的检查：按下表配制一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定T%，应符合规定。试剂浓度/%（g/mL）测定用波长/nm透光率/%碘化钠1.00220<0.8亚硝酸钠5.00340<0.8

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8特点：有两个单色器，利用吸光度差值定量，消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。12双波长光源单色器2单色器1⊿A测参斩光器12

9注意事项石英比色皿，取用时应拿取毛面，外壁用擦镜纸轻轻擦拭，不能用硬的滤纸擦，溶液装2/3高度即可，用后及时冲洗，内壁若挂水，用洗液浸泡去污。吸光度测定时应先用空白溶剂校零，扫描时应先用空白溶剂进行基线校正。光面光源

10实验安排32人分2组，每2人1台紫外分光光度仪；本周16人做紫外分析(洗玻板，3块/2人)，16人做荧光分析，下周交换。实验报告格式要求：实验题目（内容），目的要求，实验原理，所用仪器，操作方法简述，测定结果与结论，讨论（对实验成败原因的分析，注意问题，个人感想与体会等）。报告要求当天交（药典规定的仪器性能参数见补充讲义）。

11实验三、荧光法测定硫酸奎尼丁含量实验目的

12掌握荧光物质的激发光谱与发射光谱的概念与测定方法；掌握用校正曲线法进行荧光定量分析；熟悉荧光分光光度仪的使用方法。仪器日本分光FP-6500荧光分光光度仪日本日立F-5000荧光光谱仪

13记录仪光源激发单色器样品池发射单色器检测器放大器吸光物质荧光分光光度计结构示意图激发光谱荧光光谱？扫描200-400nm激发光谱扫描300-600nm发射光谱ExEmEx

14激发光谱和荧光光谱的特征与测定方法，ex和em的意义与确定方法。荧光强度激发光波长ex激发光谱荧光强度发射光波长em荧光光谱荧光测定适合于稀溶液的测定，若溶液浓度过大将产生荧光淬灭，导致荧光读数与浓度不成比例。

15标准曲线：精密称取对照品13.0mg→100.0ml，精密吸取10ml→500.0ml(2.6ug/ml)（已做）精密吸取(2.6ug/ml)标准液1，3，5ml，分别置25ml容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。作为对照液（测定时从低浓度开始至高浓度）。供试液配制：精密称取硫酸奎尼丁80.0mg→100.0ml，精密吸取10ml→500.0ml(16.0ug/ml)（理论值，已做）精密吸取16.0ug/ml样品液1ml，置50ml量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试液。

16先进行荧光扫描，确定ex和em。激发光谱：固定荧光波长430nm，扫描250-400nm，获得ex≈350nm(实测值)发射光谱：固定激发波长(实测值)，扫描400-600nm，获得em≈449nm(实测值)荧光测定：在实测ex和em条件下测定空白、标准曲线（低→高浓度）、样品（荧光杯必须洗净）。每个测定溶液读数3次。

17根据读数和标准液浓度绘制标准曲线计算样品液浓度C样，然后计算硫酸奎尼丁百分含量：%=×100%。注意事项：容量仪器的准确操作；荧光比色皿的拿取、使用、洗涤注意点；荧光测定时应先用空白溶剂校零，标准与样品为相同溶剂时，校零只做1次即可。C样×DW浓度单位浓度单位稀释倍数

18注意事项容量仪器吸管、容量瓶的准确操作荧光比色皿的拿取、使用、洗涤注意点（在台面上操作）荧光测定时应先用空白溶剂校零，标准与样品为相同溶剂时，校零只做1次即可

19实验安排32人分2大组，每4人1台荧光分光光度仪，配3个标准溶液和1个样品溶液。本周16人做荧光分析，16人做紫外分析，下周交换。实验报告要求：同紫外仪性能测定