标记抗体技术医学ppt

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1、标记抗体技术抗原与抗体能特异性结合，但抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复合物是不可见的。有一些物质即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检测出，如果将这些物质标记在抗体分子上，可以通过检测标记分子来显示抗原抗体复合物的存在，根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性建立的技术，称为标记抗体技术(labeledantibodytechnique)。高敏感性的标记分子主要有荧光素、酶、放射性同位素3种，由此建立免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术和放射免疫分析。其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被广泛应用于病原微生物鉴定、传染病的诊断、分子生物学中的基因表达产物分析等各个领域。荧光素和

2、荧光酶    发光器官主要靠两种物质产生光，一种叫荧光素，另一种叫荧光酶。当荧光素被一定波长的光激发时就会产生光，而荧光酶则是一种催化剂，它能帮助荧光素与氧结合产生氧化反应，同时产生光。深海动物发出的光是一种不发热的“冷光”，由于发光动物含有的荧光素和荧光酶不同，因此发出的光的颜色也不同，主要有橙、红、黄、绿、蓝、紫、白等颜色，但以蓝绿色光居多。荧光素和荧光酶    大多数发光生物是通过自己身体内的荧光素和荧光酶产生光，而少数发光生物则是依靠寄生在其发光器内的发光性细菌发光，例如有一种闪光鱼，在其发光器内寄生着上百亿个发光细菌。有些水母只能通过吃掉其他发光动物才能发光。异硫氰酸荧光素(f

3、luoresceinisothiocyanate,FITC)FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。四乙基罗丹明(rhodamine,RB200)RB200为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈现橘红色荧光。常见的荧光素四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocynate,TRITC)TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重

4、标记或对比染色。常见的荧光素藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）：PE是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，红色荧光。酶作用后产生荧光的物质:某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。辣根过氧化物酶。蓝色常见的荧光素碘化丙啶（propidiumiodide，PI）：可选择性地嵌入核酸（DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。红色荧光多甲藻叶绿素蛋白（peridininchlorophyllprotein，PerCP）：PerCP是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物。深红色常见的荧光素生物学、化学和细胞学实验的特殊试剂：藻蓝蛋白还是一种

5、十分稀有的色素蛋白，具有荧光特性，当受光激发，可发出强烈的红色荧光，用于肿瘤和癌症的临床体外诊断上，对细胞的早期癌变诊断意义重大，可作为一种新型的光敏剂。藻蓝蛋白藻红蛋白流式细胞仪测定常用的荧光染料有多种,它们分子结构不同，激发光谱和发射光谱也各异,选择荧光染料时必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长(如氩离子气体激光管,它的发射光波488ηm,氦氖离子气体激光管发射光波长633ηm）。488ηm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）、PI（碘化丙啶）、CY5（化青素）、preCP(叶绿素蛋白)、ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。它们的激发光和发射光波长

6、分别是：染料名　　　激发光波长（ηm）      发射光峰值（ηm）FITC488                     525（绿）PE488                     575（橙红）PI488                     630（橙红）ECD            488                     610（红）CY5488                     675（深红）PreCP          488                     675（深红）合适荧光素的选择：（1）具有与蛋白质形成共价键的化学基团。（2）荧光效率高

7、，标记后下降不明显。（3）荧光色泽与背景色泽对比鲜明。（4）标记后能保持生物学活性和免疫活性。（5）标记方法简单、快速。（6）安全无毒。免疫荧光抗体技术(immunofluorescenceantibodytechnique)是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察荧光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。其中，最常用的是以荧光素标记抗体或抗抗体，用于检测相应的抗原或抗体。第1节免疫荧光抗体