gbt 14926.43-2001 实验动物 细菌学检测 染色法、培养基和试剂

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1、ICS65020.30I344词免费标准网(www.freebz.net)臀中华人民共和国国家标准GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂Laboratoryanimal-Bacterioogicalmonitoring-Staining,mediaandreagents2001-08-29发布2002-05-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总婿免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.freebz.net)GB/T14926.43-2001前言本标准规定了实验动物微生物学检测

2、的染色法、培养基和试剂。在以前的相关标准中对染色法、培养基和试剂的具体内容没有进行描述，基本上是引用GB4789.4-1994《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验),GB4789.10一工994(食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验),GB4789.工工-1994《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》和GB4789.28-1994《食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂》中相关内容，给本标准的使用造成不便。为将染色法、培养基和试剂的配制方法和操作程序标准化并便于查找，特制定本标准。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动

3、物学会。本标准主要起草人:李红、黄韧、范薇。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.freebz.net)中华人民共和国国家标准实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂GB/T14926.43-2001Laboratoryanimal-Bacteriologicalmonitoring-Staining,mediaandreagents范围本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬、猴的细菌学检测。2原理实验动物微生物从培养基中摄取营养物质，维持正常的生长繁殖和代谢，其所含细胞物质

4、能与各种染料结合，呈现不同颜色。3染色液的配制和染色法3.1革兰染色法3.1.1结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸钱水溶液80mL将结晶紫在乳钵内研磨，用乙醇溶解，加人草酸按水溶液混合，即可使用。3.1.2碘液碘1g碘化钾29蒸馏水300mL将碘化钾与碘先用少量水溶解，待全部溶解后，加蒸馏水至300mL,3.1.3脱色液95%乙醇3.1.4沙黄(番红)复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄在乳钵内研磨.用乙醇溶解，加人蒸馏水混合，即可使用。3.1.5染色法3.1.5.1涂片风干后在火焰上固定。3.1.5.2滴加结晶紫染色

5、液，染色1min，流水冲洗，甩干。中华人民共和国国家质It监督检验检疫总局2001-08-29批准2002-05-01实施1免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准网(www.freebz.net)GB/T14926.43-20013.1.5.3滴加碘液，媒染1min，流水冲洗，甩干。3.1.5.4滴加95%乙醇脱色约15^30s，流水冲洗，甩干。3.1.5.5滴加沙黄复红染液，染色1min，流水冲洗，甩干，风干或滤纸吸干后镜检。3.1.6结果使用油镜放大1000倍观察，革兰阳性菌呈蓝紫色，革兰阴性菌呈红色。3.2姬姆萨染色法3

6、.2.1姬姆萨染液3.2.1.1储存液姬姆萨粉末。.59甘油(中性)25mL甲醇25mL将姬姆萨粉于研钵内，先加少许甘油研磨，至甘油加完为止，倒人棕色试剂瓶中，再用少量甲醇加人研钵内，逐渐将甘油洗下，倒人试剂瓶内，直至用甲醇洗净研钵体内甘油为止。并将剩余甲醇一并加人瓶中，塞紧瓶盖，充分摇匀，置600C温箱内24h或室温一周后即可使用。3.2.1.2应用液使用前储存液用pH7.2-7.4PBS10倍稀释即成。3.2.2染色法涂片或压印片风干后用甲醇固定5min后滴加姬姆萨应用液，染色20-30min，用流水冲洗，甩干，风干或滤纸吸干后镜检。3.2.3结果使

7、用油镜放大1000倍观察，组织、脓汁或红细胞呈红色，细菌呈紫色。3.3英膜染色法3.3.1染色液甲醛中加人2%印度黑汁;革兰染色液中的沙黄复染液。3.3.2染色法3.3.2.1取一接种环肉汤培养物于载玻片上，再取一接种环甲醛印度黑汁与其混匀，推成薄片，自然干燥后火焰固定。3.3.2.2滴加沙黄复染液，染色30s，吸去多余液体，干燥后油镜观察。3.3.3结果使用油镜放大1000倍观察，细菌周围有透明带者为英膜染色阳性。3.4支原体菌落染色法3.4.1染色液(Dienes染色液)美兰2.59刃天青(azure)1.25g麦芽糖10.0g苯甲酸。.29蒸馏水1

8、00mL3.4.2染色方法临用前将染色液用蒸馏水稀释100^-300倍，滴加到疑