nk细胞的输液方法ppt课件

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1、NK细胞的输液方法前言随着现代生物学研究的不断突破，把生命科学推进一个黄金时代。虽然很多方面尚处于初级阶段，但已让人们满怀期待。此时此刻，任何科研型的临床医生都不会置身其外，漠视这个时代遍地的创新机会。免疫细胞治疗就是其中的一个研究热点。抗癌免疫细胞进化史美国研究人员早在1985年就首次取患者的自身淋巴细胞，在实验室中通过IL-2反复诱导细胞增殖，制备出大量杀伤性淋巴细胞，即LAK细胞，回输给黑色素瘤患者，开辟了免疫治疗肿瘤的新途径。但由于T细胞体外增殖效率不高，体内杀瘤活性不强，且部分患者出现副反应，所以最终淡出临床。于是，上世纪90年代人们想到了抗原呈

2、递细胞。树突状细胞（DC），是体内最有效的辅佐T细胞的抗原呈递细胞。在免疫应答起始阶段，伤害人体的外来抗原进入体内，但T细胞上的受体只能识别一部分抗原，此时呈递细胞捕获未被识别的抗原，传递给T细胞，发生免疫反应，从而杀伤外来抗原。相比之下，在肿瘤细胞的发生、发展过程中，作为固有免疫系统的重要组成细胞——自然杀伤细胞（NK），不仅可以直接杀伤肿瘤细胞，还可以分泌细胞因子调节免疫细胞，进而在抗肿瘤免疫中发挥重要作用，这时又一种新型免疫细胞——NKT细胞进入专家的视野：其既具有NK的功能，能直接杀伤肿瘤和病毒细胞，有良好的免疫调节作用，又有抗原呈递功能，大大提高

3、了杀伤肿瘤的能力。免疫细胞的优点细胞免疫治疗的优点是创伤小，病人易接受，相对安全，费用也能让普通人接受。从理论上讲，该方法符合个体化、绿色治疗的特征，即把个体自身的细胞从外周血提取出来，在体外经过激活、扩增，然后再回输到体内，杀灭体内的外来抗原。在实际操作中，这项技术也不复杂，回输途径有多种。但是，在提取、实验室培养、回输整个过程中，要求严格的无菌操作，所以对实验室安全要求非常高。在这方面国家应出台相关操作规范和实验室标准，严格管理。用于移植治疗的细胞的种类主要有肝细胞、胰岛细胞、树突状细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞、胚胎干细胞、造血

4、干细胞、间充质干细胞等，每种细胞都有不同的生物学特性。用于移植治疗的细胞的种类1．1普通体细胞1．1．1肝细胞肝脏是由肝细胞组成。用于移植的肝细胞肿瘤包括:第一，异种肝细胞。目前最常用的是猪肝，它能提供与人肝结构相似、功能相近的肝细胞。Nishitai等在免疫缺陷鼠的脾脏内移植猪肝细胞，发现新鲜分离的猪肝细胞较之培养后，4℃保存或冻存后的猪肝细胞在移植后具有更好的活力和分泌功能。提示新鲜分离的猪肝细胞是首选的异种肝细胞源。第二，成熟的人肝细胞。这是最理想的细胞来源。第三，胎肝细胞。胎肝细胞是由流产胎儿肝脏分离所得的肝细胞及其前体具有分化增殖能力强、免疫原性

5、弱及更能抵抗低温贮存损伤等优点。第四，永生化肝细胞株。国内有学者以重组质粒SV40LT/pcDNA3．1经脂质体转染来源于正常人肝细胞，成功构建水生化人源性肝细胞系HepLL，研究表明HepLL具有正常人肝细胞的形态特征和生物学功能［2-3］。1．1．2胰岛细胞胰岛是由数十～数千个细胞组成的细胞团。按染色和形态学特点，人胰岛细胞主要分为A(α)细胞、B(β)细胞、D细胞和PP细胞。A细胞约占胰胰岛细胞的20%，分泌胰高血糖素，升高血糖;B细胞占胰岛细胞的60%～70%，分泌胰岛素，降低血糖;D细胞占胰岛细胞的10%，分泌生长激素抑制激素;PP细胞数量很少，

6、分泌胰多肽。其中β细胞是治疗糖尿病的功能细胞，主要分布于胰岛中心部位，可将胰岛细胞从胰岛组织中用胶原酶等消化并分离出来治疗糖尿病。1．2免疫细胞1．2．1树突状细胞树突状细胞(dendriticcell，DC)是一种高效杀伤活性的异质性细胞群，其在外周血淋巴细胞中的比例为1%～5%，不具有吞噬能力，但能够摄取、加工和呈递抗原，刺激体内的初始型T细胞活化，启动机体免疫应答，因而是一种抗原呈递细胞。此外DC还可以通过直接或间接方式促进B细胞的增殖与活化，调控体液免疫应答;刺激记忆T细胞活化从而诱导再次免疫应答。DC经体外大量扩增后，具有显著杀伤肿瘤和清除病毒活

7、性，在机体的细胞免疫和体液免疫中起重要的调控作用。DC细胞疗法的过程是取患者自身的单个核细胞在体外活化、增殖后，然后再转输入患者体内，诱导机体产生特异性或非特异性的免疫应答，在患者体内发挥抗肿瘤和抗病毒作用［4］。1．2．2细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercell，CIK)是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子(如抗CD3单克隆抗体、IL-2和IFN-γ等)共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样T淋巴细胞。CIK细胞能以

8、不同的机制识别肿瘤细胞，通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进