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1、GB/T16285-1996前言食品中葡萄糖的测定方法，一般采用《国际食搪分析方法统一委员会》规定的“兰一埃农法”(LaneandEynon'smethod)和“姆松一华尔格法”(MunsonandWalker'smethod)，即菲林氏溶液氧化还原滴定法。此法虽沿用已久，但测定结果只是近似值。因使用菲林氏溶液滴定葡萄糖(还原搪)时，其他具有还原能力的单搪会干扰测定结果。本标准采用的酶一比色法和酶一电极法是在检索了近20年107篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。酶一比色法和酶一电极法使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有专一性，只能催化葡萄糖水溶液中的(3
2、-D-葡萄糖起反应(被氧化)，因此测定结果是真实值。本标准的酶一比色法为仲裁法;酶一电极法为快速法。本标准的附录A,附录B都是标准的附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:中国农垦北方食品监测中心(酶一比色法);山东省科学院生物研究所(酶一电极法)。本标准经全[A食品工业标准化技术委员会秘书处审核。本标准主要起草人:张宗城、刘宁、冯德荣、孙士青、宋家华、郝煌。中华人民共和国国家标准食品中葡萄糖的测定方法GB/T16285-1996酶一比色法和酶一电极法Methodfordeterminationof口ucose加food-Enzyme
3、-colorimetr阮.dh目andenzyme-electrodemethod，范围本标准规定了用酶一比色法和酶一电极法测定食品中葡萄搪的方法。本标准适用于各类食品中葡萄糖的测定;亦适用于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定。本标准酶一比色法的最低检出限量为。.01pg(葡萄糖/mL(试液);酶一电极法的最低检出限量为1.0mg/100mL,2酶一比色法2.1原理葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化卜D-葡萄糖(葡萄搪水溶液状态)氧化，生成D-葡萄糖酸-a一内醋和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色醒亚胺。在波长505
4、nm处测定酿亚胺的吸光度，计算食品中葡萄糖的含量cC。HI,:,0O。,+0:2-i塑C,H,,O.+HZO2H:,0O:z+cC，6H。,阳OH+cCl=，Hl=:N3,oOnPODc6H,NO+HY02.2试剂2.2.1组合试剂盒1号瓶:内含。.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0)100mL，其中4-氨基安替比林为0.00154mol/L;2号瓶:内含。.022mol/L苯酚溶液100mL,3号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)400U活力单位)、过氧化物酶(辣根，peroxidase)1000U活力单位)。1,2,3号瓶须在4℃左右保
5、存。2.2.2酶试剂溶液:将1号瓶和2号瓶的物质充分混合均匀，再将3号瓶的物质溶解其中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使菊萄糖氧化酶和过氧化物酶完全溶解。此溶液须在4℃左右保存，有效期1个月。2.2.30.085mol/L亚铁氰化钾溶液:称取3.7g亚铁氰化钾〔K4Fe(CN),·3H,O,GB1273，分析纯]，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。2.2.40.25mol/L硫酸锌溶液:称取7.7g硫酸锌(ZnSO,·7H,O,GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。2.2.50.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于1000
6、mL重蒸馏水中，摇匀。2.2.6葡萄糖标准溶液:称取经10。士20C烘烤2h的葡萄糖(HG3-1094，分析纯)1.0000g,溶于重一~~~~~，....~~--~--州.~~~-国家技术监督局1996一04一10批准1996一12一01实施GB/T16285-1996蒸馏水中，定容至100ml，摇匀将此溶液用重蒸馏水稀释叭。。一叭。。，即为200pg/mL葡萄搪标准溶液。2.3仪器和设备实验室常规仪器及下列各项:2.3.1研钵或粉碎机。2.3.2分析筛。2.13组织捣碎机。2.3.4恒温水浴锅。2.3.5可见光分光光度计。2.3.6微量移液管:1.00mL，精
7、度。.01mLe2.4试样的制备2.4.1固体样品粉末状样品:取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100目分析筛，置于密闭的玻璃容器内。新鲜水果、蔬菜等固体样品:取有代表性的可食部分至少2009，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。2.4.2糊状样品取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。2.4.3固液体样品取有代表性的样品至少2009，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。2.4.4液体样品取有代表性的样品至少200mL，充分混匀，置于
8、密闭的玻璃
