DB15∕T 537-2013 马铃薯粉痂病菌检疫鉴定方法(内蒙古自治区)

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1、E一-一一ICS65.020.20BHì备案号36654-2013直+甲挥部白白tTιF·蹦出~14内古I口区方标;佳DB15/T537-.2013马铃薯粉痴病菌检疫鉴定方法Ideritificationof牛ongosporasubterraneaLagerh~im2013一01-20发布2013-03~20实施内蒙古自治区属量技术监督Æij发布OB15/T537二2013日111=1本标准附录A、B为资料性附录。本标准由内鼓古LL'，入境检验检疫局提出井解释。本标准起草单位:内蒙占出入境检验检疫局，满洲里出入境检验检疫局。标准主要起草人:杨永生、刘讳琦、董奇彪、

2、张贵、刘振伟、郭铁筝、赵治国、潘罔卿、李刚、杭小溪。D815/T537-2013马铃薯粉癫病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了马特薯粉而病菌的检夜鉴定方法。本标准适用于马铃薯种辑:、及夹带子土壤中的马怜;草都}制病菌的检疫手11鉴定。2原理2.1马铃薯粉踊病菌分类地位马铃薯粉丽娟菌(牛ongosporasubterranea(Wallr礼agerheim)属根肿菌门(Plasmodiophoromycota)根~~菌纲(Plasmodiophoromycetes)粉J)J[t菌属(牛ongospora)。英文名potatopowd巳ryscab，简称马铃薯粉到ü病。2

3、.2鉴定原理马铃薯粉刷病菌。1寄二jz上的症状、病原菌的形态学特征。3术语和;主义?列术语和定义适用于本标准3.11:木眠于包子囊re到lngsporangium白休眠于包子集合成的中空的海绵状球体。3.2游动于包子zoospore具有j盹毛可以游功的础ro多见于某些藻类手IJ真菌。既能进行无性生夕在3也进行有性生殖。本陆的游动甩子近球形，无胞壁，顶牛.不等民的现鞭毛，在水巾能游动;静11-后成为变形体，从根毛旦旦皮孔侵入寄主内虫病。游动袍子及其静LL:后所形成的变形体，成为本硝韧侵染源。4仪器和用具4.1仪器体视显微镜，生物显微镜、测融).，天平(感量0.001

4、g)、超冲工作台、光照生物培养箱、高压灭菌锅、离心机、套筛、冰箱。4.2用具烧杯，三角瓶，量筒，试管，离心管，培养皿，载玻片，盖玻片，接菌针，移液器，摄子，刀片，酒精灯等。5试剂和培养基DBI5/T537-20135.1试剂0.5%的甲基监榕液、1%酸性品红。5.2培养基0.3%的水琉脂培养基6鉴定方法6.1症状检验马龄薯粉册病由主要为害块21主及根部，有时平:也可染病。被侵染的需茄苗柏株生民不整齐，植株矮化，根系肿大。块主染病初在表皮上现针头太的;国色小斑，外闺有半透明1'1台晕环，后小斑逐渐隆起、膨大，成为直径3~5mm不等的"疤斑"，其表皮尚未破裂，为粉掘的"

5、封闭疤"阶段。后随病情的发展"地斑"表皮破裂、反卷，皮问11织现桔红色，散出大量深褐色粉状物(抱子囊球)，"疤斑""1'.ß白IF1火山口状，外国有木栓质晕环，为粉刷的"开放炮"阶段。根部染病于根i'的→侧长;山豆粒大小单生且~聚生的瘤状物。(形态特征参见阳录B)。6.2块茎检验将感病薯块在水下刮l洗丰净，室温.l、自然晾干。在病斑的不同部位进行徒手切片，将切片放入0.5%的甲基蓝搭液中染色3min，取LlJ启用灭菌ï](冲洗2~3次，生物显橄镜下观察。6.3土壤检验(番茄幼苗诱饵法)通过毛刷或水洗(少量水〉方法小心收集块主表面土壤，并注意收集包装内外散落的士壤。将

6、土样风干、研细、过筛，除去寻[块哼朵质，取底层筛T土壤，各肘。取1g二l二壤加入到1000mL0.3%的水琼脂中配成士壤液。将培育50d的健康番茄幼苗移栽到装有灭自I匠石的育苗钵中，每株番茄i)]曲加10mL士壤液，每个处理20株，主泪F培育，7d提l次营养液，30d左右检查番茄根系。根毛感染多发生在各茄根的尖端至2~4cm位置上，将~~察的番茄根在1%酸性品红染色?夜中浸清数分钟，;](洗后在生物显做镜(JOO倍)下镜检。(形态特征参见附录B)。7鉴定特征7.1病菌侵染马铃薯块茎鉴定特征生物扭做镜观事取自马t专著块主上的病斑切片，可以观察到大量体眠于包子囊(f包子

7、团)，由许多近球形的黄色主黄绿色的休眠徊于雪慧集结而成，外观如海绵:忧球休，直径15~85μm，具中腔空穴。林H时也子囊球形至多角形，盲和3.5-4.5μ，lli，壁不太晖，平滑。(形态特征参见附录B)。7.2番茄根系镜检鉴定特征感染的番茄根部镜检可~Jhl窜到马怜薯袖而病菌的变形体、休眠fffi:f囊。8结果判定凡外观症状和病原前形态均样合6.1、7.1描述，即可判定为马铃薯粉到[1病菌Spongosporasubterranea(Wallr.)Lagerh.07.2中番茄根系镜检鉴Æ特征可作为结果判定的辅助依据口2DB15/T537二20139样品及菌种保存