国家标准：gb 4789.31-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.31—2013食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验2013-11-29发布2014-06-01实施GB4789.31—2013前言本标准代替GB/T4789.31-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法》。本标准与GB/T4789.31-2003相比,主要变化如下：——修改了操作步骤；——增加了附录B。IGB4789.31—2013食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科

2、噬菌体诊断检验1范围本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断方法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌。本标准适用于各类食品和食源性疾病事件样品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的检验。本标准适用于食品行业从业人员肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌、培养的设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃,42℃±1℃，50℃±1℃;b)厌氧培养装置：41.5℃±0.5℃;c)显微镜：10倍～100倍;d)水平仪：噬菌体试验的工作台面应调整至水平位置;e)已灭菌1mL一次性注射器（应为塑料材质），针头无编号

3、，使用前测定每滴5L~10L（每mL有100~200滴）可用;f)微量移液器及吸头（10L和5L）;g)定量移液器及吸头（100L和50L）;h)无菌吸管：10mL、5mL、1mL;i)无菌毛细管;j)无菌培养皿：90mm;k)无菌棉签;l)带盖的灭菌小试管：8mm×50mm;m)载物玻片。3培养基和试剂3.1亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A中的A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A中的A.2。3.3志贺氏菌（BCT）增菌液：见附录A中的A.3。3.4营养肉汤（NB）：见附录A中的A.4。3.5营养琼脂（NA）：见附

4、录A中的A.5。3.6营养半固体琼脂（NSA）：见附录A中的A.6。1GB4789.31—20133.7三糖铁琼脂（TSI）：见附录A中的A.7。3.8葡萄糖铵琼脂：见附录A中的A.8。3.9肠杆菌科诊断用噬菌体，7种和3种。必要时可再购置大肠埃希氏菌分型噬菌体（6种）一套。安瓿开启后用无菌毛细管吸出移入灭菌小试管内，如果每次使用量很少，可分装于2~3支试管内，保存于5℃冰箱备用。3.10沙门氏菌因子血清，志贺氏菌分型因子血清，致泻大肠埃希氏菌分型因子血清。因子血清的种类视需要而定。4检验程序4.1沙门氏菌的检验程序沙门氏菌的检验程序见图1。2GB4

5、789.31—2013检样前增菌、增菌和分离挑取可疑菌落噬菌体试验TSI(斜面、底面、产气、H2S)蛋白胨水（靛基质）尿素（pH7.2）,KCN,赖氨酸O-1裂解非如左述的各种噬菌体其他均不裂解各种裂解结果均不裂解H2S+,靛基质－，H2S+，靛基质+，H2S－，靛基质－，非如左述的尿素－，KCN－，尿素－，KCN－，尿素－，KCN－，各种反应结果赖氨酸＋赖氨酸+赖氨酸+/－甘露醇、山梨醇ONPG＋,＋,－－,－+沙门氏菌非沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌血清学试验证实血清学试验证实血清学试验证实报告图1沙门氏菌的检验程序4.2志贺氏菌的

6、检验程序志贺氏菌的检验程序见图2。3GB4789.31—2013检样增菌和分离挑取可疑菌落TSI，葡萄糖半固体TSI底层产酸,斜面产碱，H2S－非如左述的各不产气，无动力种反应结果噬菌体试验Sh裂解，并呈现Sh不裂解各种裂解模式血清学试验与裂解模式相符血清学试验与裂模式不相符且被1RTDSh裂解或不被1RTDSh裂解葡萄糖铵试验生化分群试验必要时加做乙酸钠、克氏柠檬酸盐、黏液酸、七叶苷、水杨苷试验七叶苷水杨苷试验志贺氏菌属葡萄糖铵+非志贺氏菌非志贺氏菌分群及分型结果或任何其他阳性结果非志贺氏菌报告图2志贺氏菌的检验程序4GB4789.31—2013

7、4.3致泻大肠埃希氏菌的检验程序致泻大肠埃希氏菌的检验程序见图3。检样增菌和分离乳糖发酵或不发酵的菌落3~5个噬菌体试验E和或Sh、E－4E和或Sh、E－4各种噬菌体均不裂解噬菌体不裂解噬菌体裂解氧化酶－，G－杆菌其他噬菌体裂解不同来源分离的菌株TSI，靛基质，其裂解模式具有同一性pH7.2尿素，KCN,赖氨酸，动力TSI底层＋，H2S－,非如左述KCN－，尿素－各种反应结果血清学试验ETEC+STEC(O157)EPEC+EIEC+非如左述各种反应结果肠毒素+赖氨酸－，靛基质+，stx1,stx2,hly+eae+动力－(O124动力+/－)产肠毒

8、素非致泻大非大肠产志贺毒素肠道致病性肠道侵袭性非大肠大肠埃希氏菌肠埃希氏菌埃希氏菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌大