GBT4789.31-1994-食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法.pdf

《GBT4789.31-1994-食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、GB4789.31—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofSalmonellae,Shigellae,anddiarrhoeaCausativeEscherichiacolibymeansofthediagnosticTypingphagesetforenterobacteriaceaeGB4789.31—19941主题内容与适用范围本标准规定了应用肠杆菌科

2、噬菌体诊断法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的基本要求、操作程序和结果判定。本标准适用于各种食品、食物中毒的检验，也适用于食品从业人员的肠道沙门菌和志贺氏菌带菌检验。2引用标准GB4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1温箱：36±1℃。3．2水平仪。3．3灭菌平皿：90mm×15mm。13．4定量滴管：每滴约10uL。用输液用的玻璃接

3、管配4号针头，头灭菌。23．5橡皮乳头。3．6灭菌棉签。3．7酒精灯。3．8接种棒，镍铬丝。3．9试管架。4培养基和试剂4．1营养琼脂、营养肉汤按GB4789.28中3.7和3.8进行。4．2蛋白胨水、靛基质试剂按GB4789.28中2.13进行。4．3三糖铁琼脂按GB4789.28中3.24和3.25进行。4．4肠杆菌科诊断用噬菌体，7种和3种。安瓿启开后用无菌毛细吸管吸出移入灭菌小试管内，用无菌胶塞塞紧，放于4℃冰箱备用。5检验程序..　.　.　.　.　.i
□肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序见图1：中华人民共和国卫生部

4、1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.31—1994图1肠杆菌科诊断噬菌体检验沙门氏菌的程序5．2肠杆菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序见图2：图2肠相干菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序5．3肠杆菌科诊断用噬菌体检验致泻大肠埃希氏菌的程序见图3：图3肠杆菌科诊断用噬菌体检验致泻大肠埃希氏菌的程序6检验步骤6．1前增菌、增菌和分离6．1．1沙门氏菌的前增菌、增菌的分离，按GB4789.4进行。6．1．2志贺氏菌的增菌和分离，按GB4789.5进行。6．1．3致泻大肠埃希氏菌的增菌和分离，按GB4789.6进

5、行。6．2噬菌体试验6．2．1培养基的准备营养琼脂平板（含琼脂1%～1.5%，琼脂量视其凝固性而定，约为一般用量的3/4），每个9cm平皿中约25mL，放在水平台面上俟其凝固，翻转平板，在36℃半开皿倒置约1h，以烘干培养基表面水分，并使琼脂具有显著的吸水性。6．2．2试验菌液的准备从选择性鉴别平板上挑取菌落，一般应多挑几个菌落，以防遗漏。检验沙门氏菌时，不但应挑取乳糖阴性产H2S和不产H2S的菌落，还应挑取乳糖阳性产H2S的菌落。检验大肠埃希氏菌时应挑取乳糖阳性或阴性的菌落3～5个。检验志贺氏菌时应挑取可疑菌落接种三糖铁琼脂和葡

6、萄糖半固体管，于36℃培养过夜，次日选取三糖铁底层产酸、斜面产碱，不产H2S，不产气无动力的培养物。下述两种方法可供选用。6．2．2．1一法：将待试菌落接种于营养肉汤管内，于36℃培养过夜。挑取此肉汤培养物一满环，稀释于一管盛有1～2mL的蛋白胨水试管内，使成1：200～61：400稀释菌液，含菌量约为1×10/mL。6．2．2．2二法：用接种针在鉴别平板上轻轻蘸取可疑菌落，挑取菌量不宜过多，稀释于一管盛有1～2mL蛋白胨水试管内，使其含菌量约与一法相似。6．2．3涂抹试验菌液6．2．3．1斑点涂抹法：将营养琼脂平板表面自圆心超分

7、为三等份，每等份可供涂抹一株细菌培养物。每挑取试验菌液一满环，涂抹直径约1cm的菌斑一个。每株培养物涂抹7个菌斑，外圈4个，内圈3个。6．2．3．2棉签涂抹法：用无菌棉签蘸取试验菌液并略挤去过多液体，在如上琼脂平板表面三分之一的区域内涂抹。三个涂抹区之间保持适当距离。略等数分钟，俟菌液干燥。6．2．4滴加噬菌体中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.31—1994用定量乳头商管在一个菌斑上滴加噬菌体一滴，依次为O-I、C、Sh、E、CE、E-4和Ent。滴管上安装4号针头，每毫升约为100

8、滴。每支滴管只滴加一种噬菌体，针类绝对不能接触平板表面，严格防止交叉污染。每用一支滴管，可把全部待试菌应滴加噬菌体的菌斑部位全部滴加完毕。滴加噬菌体时必须将琼脂平板放在水平台面上。待7种噬菌体均滴加完毕后，略等灵敏分钟，待噬菌体液干燥。翻转平板，放