GB 4789.31-1994 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法

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1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法GB4789.31-94MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofSalmonellae,Shigellae,anddiarrhoeacausativeEscherichiacolibymeansofthediagnostictypingphagesetforenterobactertaceae1主题内容与适用范围本标准规定了应用肠杆

2、菌科噬菌体诊断法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的基本要求、操作程序和结果判定。本标准适用于各种食品、食物中毒的检验,也适用于食品从业人员的肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验。2引用标准GB4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料,月J...温箱:36士1℃。,门J乙‘水平仪。qqJ.J灭菌平皿:90mmX15

3、mm,,月Jq恤定量滴管:每滴约‘。。“。用输液用的玻璃接管配4合号针头,灭菌。q‘jJ.橡皮乳头。qC口.U灭菌棉签。几工‘JI…酒精灯。住OJU接种棒,镍铬丝。,八曰3试管架。4培养基和试剂4.1营养琼脂、营养肉汤按GB4789.28中3.7和3.8进行中华人民共和国卫生部1994一03一,8批准1994一09一01实施GB4789.31一洲4.2蛋白陈水、靛基质试剂按GB4789.28中2.13进行。4.3三糖铁琼脂按GB4789.28中3.24和3.25进行4.4肠杆菌科诊断用噬菌体,7

4、种和3种。安瓶启开后用无菌毛细吸管吸出移入灭菌小试管内,用无菌胶塞塞紧,放于4℃冰箱备用。5检验程序5.1肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序见图1:检样前增菌、增菌和分离,按GB4789.4妇主取可疑菌落咙菌体试脸TSI(斜面、底层、产气、His)蛋白陈水(旋基质)尿素(PH7.2),KCN,赖氨酸0-1裂解非如左述的各种曦菌体其他均不裂解各种裂解结果均不裂解HZSt,靛基质一,HES+,靛基质+,日:5一,艘基质一,非如左述的尿素一,KCN-,尿素一K(:N一,尿素一,KCN-,各种反应结

5、果赖氨酸+赖氮酸十赖氨酸干/一甘嚣醉、山集醉ONPG+.+,一I+沙门氏菌非沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌血清学试验血清学试脸血清学试验报告图1肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序334GB4789.31-945.2肠杆菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序见图2:检样增菌和分离.按GB4789.5挑取可疑菌落TS工葡萄搪半固休TSI底层产酸,斜面产孩,HyS-非如左述的不产气,无动力各种反应结果魄菌体试验Sh裂解,并呈现Sh不裂解各种裂解棋式血清学试脸与裂解棋式相符血清学试验与裂解

6、模式不相符且被1RTDSh裂解或不被1RTDSh裂解荀翻精馁试验生化分群试验必要时加做乙酸钠、克氏柠徽酸盐,枯液酸、七叶普、水杨普试验志贺氏菌属葡萄糖铁十非志贺氏菌非志贺氏菌分群及分型结果或任何其他阳性结果非志贺氏菌报告图2肠杆菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序335GB4789.31-945.3肠杆菌科诊断用噬菌体检验致泻大肠埃希氏菌的程序见图3:检样增菌和分离,按GB4789.6乳绪发醉或不发酵的菌落3~5个咙菌体试验E和或Sh,E-4E和或Sh,E-4各种咙菌体均不裂解魄菌体不裂解,曦菌体

7、裂解氧化醉一,G一杆菌其他噬菌体裂解不同来像分离的菌株TSI,旋基质,其裂解棋式PH7.2尿素,KCN,具有同一性位氮酸,动力TS]底层+非如左述的H2S-,KCN-各种反应结果尿素一血清学试验ETEC+EPEC+或EIEC+非如左述的EHEC(0157)各种反应结果被氨酸一,饭基质+,动力一(0124动力+/一)肠毒素+肠道致病性或非大肠产肠毒素大肠道侵袭性非致坞大非大肠肠道出血性埃希氏菌肠埃希氏菌大肠埃希氏菌肠埃希氏菌埃希氏菌大肠埃希氏菌报告图3肠杆菌科诊断用噬菌体检验致泻大肠埃希氏菌的程序

8、6检验步驻6.1前增菌、增菌和分离6.1.1沙门氏菌的前增菌、增菌和分离,按GB4789.4进行。336GB4789.31-946.1.2志贺氏菌的增菌和分离,按GB4789.5进行。6.1.3致泻大肠埃希氏菌的增菌和分离,按GB4789.6进行。6.2噬菌体试验6.2.,培养基的准备营养琼脂平板(含琼脂1%-1.5写,琼脂量视其凝固性而定,约为一般用量的3/4),每个9cm平皿中约25mL,放在水平台面上侯其凝固,翻转平板,在36℃半开皿倒置约1h,以烘干培养基表面水分,并使琼脂具有显著的吸水

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