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1、第二军医大学学报年第卷第期茶酚胺酶促放射测定法‘石一鸣以硫即几理学教研宝。儿茶酚胺酶促放射测定法其他国产化学试剂均为分析纯、是目前测定儿茶酚胺最敏感二血浆的收集和处理用肝素化的,注射器从,精确的微量测定方法之一应用于研究生理血管直接取血动物实验可从插入和病理状态下血浆或组织中儿茶酚山钩含量血竹的塑料管放血入冷却的内含和变化‘一“。测定的原理是以一腺昔〔“〕甲基溶液!∀##、,“,,甲硫氨酸
2、〔〕作为甲基供体在儿每毫升血加协的离心管放在冰内一一,,茶酚甲基转移酶的催化下将低温离心扭、,,多巴胺去甲肾上腺素和肾上腺血浆分装在聚丙烯塑料管内立即贮“一一。素转变成〔〕甲基衍生物〔〕甲存在液氮贮存器或低温冰箱一℃“、一一“氧酪胺〔〕〔〕甲墓去甲肾上无茶酚胺血浆制备作空白对照用肝素“、一一“’“,腺素〔〔〕肾上泉另膏仁〕抗凝的大鼠几
3、常温下离心。、、‘,,」,经提取薄层分离液闪计数测山浆移入透析袋在、、的含。。定血浆或组织内的量近磷酸钠缓冲液内透析,,,。年来测定方法在不断改进我们实验室在瑰分装在塑料管内低温贮存〔’,“和和等测三组织样界处理取小块组织立即。,,定方法的基础上加以改进放入液氮或干冰内称重后放入匀浆管加、倍冷却一℃的溶液材料与方法,,,低
4、温匀浆放在冰内低‘、、,一试剂样品处理和酶的例备温离心一℃上清液。一试剂〔二含分装在聚丙烯塑料竹,,一,。放化中心产品重酒内在液氮或深低温冰箱内保存、一、一、石酸重酒石酸盐酸二四制备整个制备过程均在,。硫苏糖醇均为!公司产品盐酸℃进行取雄性大鼠一断、一,一一。℃甲墓去甲肾上腺素盐酸头处死立即从门静脉注入的
5、、一,甲基肾上腺素盐酸甲氧酪胺溶液冲去肝内血液取肝称,、一一。产一乙二醇双乙胺醚四乙酸重剪碎加冷却的溶液为,,,,均为公司产品盐酸苯氧胺后匀浆低温离心、。荧光硅胶层析板℃讯将上清液倒入冷却的量筒内,,厚均为放在冰瓶内滴入醋酸溶液调至,,,,公司产品盐酸为公司
6、产静止低温离心,、,一,。一℃讯况叔戊醇双汇苯墓恶哗华」以下同请液倒入冷却的∋一,入∀%苯为上海化学式刊采购站进口分量简内缓慢顶咬!#∃∀&&()八00,,一,.装二苯咭盯恶哩上海试剂一厂产ml(30%饱不11度0℃100;百饱和度为706,一,g100ml),,20min,。品甲胺水溶液为海试剂三厂产品/搅溶静止低温离心·.‘2‘:z.s,上清液l勺居呼)]{l入(NH)5027659L(卜lmol/LMgCI
7、:Zul/使按每管50配制,..,o,o上清液成为55%饱和度)搅溶静止oZmlLEGTAS协loosmlL//盐酸20min,,,.oarne,低温离心后倒去上清液加5%饱节氧胺2件l001ml/LpgyliZ协l、2‘,“和度的冷却(NH)50溶液(每109肝重加临时新配的DTT(50卜g邝l)2件l〔H」SAM,,。1琳(3.7x10弓,10ml)将沉淀捣匀低温离心倒去上清B旧按每次所需量分装在q/,o,液每109肝重加1mml/L磷酸钠缓冲液聚丙烯塑料骨贮存于液氮吸取后用按每试,,件lol,(pH7)2ml将沉淀
8、捣溶用滴管将酶液管10冷却的imm/L磷酸钠缓冲液pH.,,移入透析袋(防止因渗透压关系使酶液过度74冲洗塑料管并注入反应混合试剂),,o,ZLTris稀释在液面处扎紧)悬挂在保持4℃含ml/缓冲液(测血浆用pHg测组..olmmol/LDTT的immolL磷酸钠缓冲4)i0瞬,/织提取液或标准曲线用pH9混匀,25
