人促甲状腺激素放射免疫分析药盒.pdf

《人促甲状腺激素放射免疫分析药盒.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、人促甲状腺激素放射免疫分析药盒【药品名称】通用名：碘[125I]人促甲状腺激素放射免疫分析药盒汉语拼音：Dian[125I]RencujiazhuangxianjisuFangshemianyifenxiYaohe125英文名：Iodine[I]HumanThyroidStimulatingHormoneRadioimmunoassayKit简称：碘[125I]-TSH放免药盒【使用目的】用于人血清样本中促甲状腺激素(TSH)的定量测定【实验原理】促甲状腺激素（TSH）是含211个氨基酸的糖蛋白类激素，分子量

2、约为28,000D，由α和β两个亚基组成。TSH主要受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素（TRH）和血液中游离的甲状腺激素（T3、T4）的调节。TRH可促进TSH的分泌，T3、T4对TSH的分泌起负反馈调节作用。另外，下丘脑分泌的生长激素释放抑制激素（SS）和肾上腺皮质分泌的糖皮质激素可降低TSH的分泌，而雌激素可增加其分泌。本品采用了第二抗体＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析试验原理：含促甲状腺激素(TSH)的样品和125I标记的促甲状腺激素(TSH)与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。反应后加入二抗及PEG，使免

3、疫复合物沉淀，离心，测沉淀放射性计数。通过标准曲线得到样本中促甲状腺激素(TSH)的浓度。【试剂主要组成成分】TSH标准品：一套共6瓶，以不含TSH的人血清为基质，用时轻轻摇匀，需冷存。TSH标准品浓度：ABCDEF（单位）015102550μIU/mL质控品：二瓶，1.0ml／瓶，分别为低和高值，浓度范围见瓶上标签，-20℃冻存（2-8℃保存六周）。。抗TSH血清：绿色溶液，需2-8℃冷存。125I-TSH：红色溶液，需2-8℃冷存。分离剂：蓝色溶液，充分摇匀后使用，需2-8℃冷存。【仪器】γ－计数器低温离

4、心机恒温水浴箱【样本要求】210微升人血清样本。采静脉血5ml于塑料试管中，静置使其凝固后，1500转／分离心，取其上清液，放置玻璃瓶中。如果样本不立即使用，可在-18℃~-25℃储存6个月。严重溶血、高浓度的脂类、胆红素对测定结果有影响。【实验方法】操作方法I：1、将实验所需试剂及样本放置室温，平衡至少30分钟以上才可进行操作；2、取60X12mm聚苯乙烯管进行编号，所有实验均做双管重复；3、取每个浓度的标准品、质控血清和样本200µl加入相应编号的试管中；4、除T、NSB管外，每管均各加入200µl抗体工

5、作液，充分混匀；5、37℃温育1.5小时；6、每管均各加入200µl标记物工作液，充分混匀；7、37℃温育1小时；8、每管均各加入500µl分离剂后，充分混匀；9、离心3500转／分，20分钟后，吸去或倾倒掉上清液；10、用γ-计数器测定每管1分钟的放射性强度计数；11、从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。【操作流程I】：（单位μL）NSB标准品质控品和人样品TA（B0）BCDEFLH123…..标准品(STD)200200A标准品(STD)200200200200200B－F质控品和样品200200200

6、200200….抗TSH血清200混匀，置37℃水浴温育90分钟125I-TSH200混匀，置37℃水浴温育60分钟分离剂500摇匀，3000RPM离心20分钟（温度低于25℃）吸去上清液沉淀物计数1分钟操作方法II：1、将实验所需试剂及样本放置室温，平衡至少30分钟以上才可进行操作；2、取60X12mm聚苯乙烯管进行编号，所有实验均做双管重复；3、取每个浓度的标准品、质控血清和样本200µl加入相应编号的试管中；4、每管均各加入200µl标记物工作液；5、除T、NSB管外，每管均各加入200µl抗体工作液，

7、充分混匀；6、室温（20～25℃）放置12~16小时；7、每管均各加入500µl分离剂后，充分混匀；8、离心3500转／分，20分钟后，吸去或倾倒掉上清液；9、用γ-计数器测定每管1分钟的放射性强度计数；10、从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。【操作流程II】：（单位μL）NSB标准品质控品和人样品TA（B0）BCDEFLH123…..标准品(STD)200200A标准品(STD)200200200200200B－F质控品和样品200200200200200….抗TSH血清200125I-TSH200混匀

8、,室温放置12~16小时分离剂500摇匀，3000RPM离心20分钟（温度低于25℃）吸去上清液沉淀物计数1分钟【实验过程中应注意】1、γ-计数器本底计数应≤100CPM/分，效率应≥75％；2、加入放射性标记物时，应做好防护、小心谨慎，以避免造成放射性污染；3、如果某一个样本的测定值高于最高浓度的标准品浓度，用零标准品以1：2或1：4的比例稀释样本后重新测试，测试结果乘以相应的稀释倍数。【质量控制