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时间：2021-11-23
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1、外源基因的原核表达外源基因表达的作用：外源基因表达泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的受体细胞，并能在其中有效表达，产生目的基因产物。外源基因的表达是研究和探索基因功能、基因表达调控机制、编码蛋白质的结构与功能的重要方法，也是制备和生产新型蛋白质药物、诊断试剂必不可少的手段。通过外源基因的表达可由宿主细胞产生大量的目的蛋白。11/21/20212大肠杆菌基因表达载体构成1、复制子：是一段包含起始位点和反式因子作用区在内的DNA片段。其功能是通过复制使载体稳定存在于大肠杆菌细胞。11/21/20219大肠杆菌基因表达载体2、筛选标记：大肠杆菌经过转化后，仅有少数细菌能获得携带外源基因
2、的质粒并稳定地传代，筛选标记可有效地筛选出转化有外源基因的阳性重组。11/21/202110大肠杆菌基因表达载体3、启动子：是与DNA依赖的RNA聚合酶相结合的一段DNA序列。启动子是调控外源基因转录的重要顺式作用元件，与mRNA的合成有很大关系，是表达载体不可缺少的元件。11/21/202111大肠杆菌基因表达载体4、终止子：在转录过程中能在特异位点将转录终止的DNA序列。有两种类型1、ρ－因子型终止子2、转录产物二级结构11/21/20211211/21/202113大肠杆菌基因表达载体4、终止子：能在特异位点终止转录的DNA序列。终止子有两种类型1、ρ－因子2、转录产物二级结构1
3、1/21/20211411/21/20211511/21/202116终止子的功能（1）、能能有效控制目的基因mRNA的长度（2）、提高mRNA的稳定性（3）、避免载体上其他基因的异常表达11/21/202117大肠杆菌基因表达载体5、核糖体结合位点：原核细胞mRNA蛋白合成起始点上游的一段非编码序列。能与30S小亚基中16SrRNA3’末端的一段序列特异结合。此序列富含嘌呤，核心序列为SD序列。11/21/202118大肠杆菌基因表达载体6、密码子：密码子有简并性，多个密码子为一个氨基酸进行编码，不同生物在利用这些密码子时其利用频率不同，不同的密码子会影响到大肠杆菌的翻译速度。11/
4、21/202119基因表达的机制基因工程技术的核心是基因表达技术。迄今为止，已构件建了不同类型的表达系统，可根据需要合理地选择适当的表达系统。外源基因在受体细胞中的表达包括：1、转录2、翻译两个环节11/21/202120基因表达的机制基因工程的核心问题：有效表达外源基因表达的关键步骤：起始转录基因表达的限速步骤：转录起始的速率构建表达系统时首先要考虑的问题是：1、选择可调控的启动子2、相关的调控序列11/21/202121目的：在细胞生长的初期不表达或低水平表达，当细胞增殖到一定的密度时，在某种特定的诱导因子的诱导下启动转
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