GB4789.9-2014食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.9—2014食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验2014-12-01发布2015-05-01实施GB4789.9—2014前言本标准代替GB/T4789.9-2008《食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验》。本标准与GB/T4789.9-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称；——修改了范围；——修改了设备和材料；——修改了培养基和试剂；——修改了样品处理；——删除了药物敏感性试验；——删除了第二法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法。IGB4789.9—2014食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验

2、1范围本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）的检验方法。本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：25℃±1℃、36℃±1℃、42℃±1℃；b)冰箱：2℃～5℃；c)恒温振荡培养箱：36℃±1℃、42℃±1℃；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)振荡器；g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；h)无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000mL；i)无菌培养皿：直径90mm；j)p

3、H计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃、100℃；l)微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气）；m)过滤装置及滤膜（0.22μm、0.45μm）；n)显微镜：10倍～100倍，有相差功能；o)离心机：离心速度≥20000g；p)比浊仪；q)微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1Bolton肉汤（Boltonbroth）：见附录A中A.1。3.2改良CCD琼脂（modifiedCharcoalCefoperazoneDeoxycholateAgar,mCCDA）：见附录A中A.2。3.3哥伦比亚血琼脂（Colu

4、mbiabloodagar）：见附录A中A.3。3.4布氏肉汤（Brucellabroth）：见附录A中A.4。3.5氧化酶试剂：见附录A中A.5。3.6马尿酸钠水解试剂：见附录A中A.6。3.7Skirrow血琼脂（Skirrowbloodagar）：见附录A中A.7。3.8吲哚乙酸酯纸片：见附录A中A.8。3.90.1%蛋白胨水：见附录A中A.9。3.101mol/L硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液：见附录A中A.10。1GB4789.9—20143.113%过氧化氢（H2O2）溶液：见附录A中A.11。3.12空肠弯曲菌显色培养基。3.13生化鉴定试剂盒

5、或生化鉴定卡。4检验程序空肠弯曲菌检验程序见图1。样品处理Bolton肉汤预增菌，微需氧36℃±1℃4hBolton肉汤增菌，微需氧42℃±1℃24h～48h接种Skirrow与mCCD琼脂平板，或显色培养基42℃±1℃24h～48h挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板42℃±1℃24h～48h镜检动力氧化酶微需氧25℃±1℃有氧42℃±1℃试验试验生长试验生长试验弯曲菌属过氧化氢酶马尿酸钠吲哚乙酸酯水试验水解试验解试验空肠弯曲菌报告图1空肠弯曲菌检验程序2GB4789.9—20145操作步骤5.1样品处理5.1.1一般样品取25g（mL)样品（水果、蔬菜、水

6、产品为50g）加入盛有225mLBolton肉汤的有滤网的均质袋中（若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤），用拍击式均质器均质1min～2min，经滤网或无菌纱布过滤，将滤过液进行培养。5.1.2整禽等样品用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部，并振荡2min～3min，经无菌纱布过滤至250mL离心管中，16000g离心15min后弃去上清，用10mL0.1%蛋白胨水悬浮沉淀，吸取3mL于100mLBolton肉汤中进行培养。5.1.3贝类取至少12个带壳样品，除去外壳后将所有内容物放到均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min，取25g样品

7、至225mLBolton肉汤中（1:10稀释），充分震荡后再转移25mL于225mLBolton肉汤中（1:100稀释），将1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。5.1.4蛋黄液或蛋浆取25g（mL)样品于125mLBolton肉汤中并混匀（1:6稀释），再转移25mL于100mLBolton肉汤中并混匀（1:30稀释），同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。5.1.5鲜乳、冰淇淋、奶酪等若为液体乳制品取50g；若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中，用拍击式均质器均质15s～30s，保留过滤液

8、。必要时调整pH值至7.5±0.2，将