《GB4789.9-1994-食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验》.pdf

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1、GB4789.9—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofCampylobacterjejuniGB4789.9—19941主题内容与适用范围本标准规定了空肠弯曲菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中空肠弯曲菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1温箱：42±1℃。3．2厌氧罐：带有双相压力表。3．3气袋法。3．4无菌平皿。3．5灭菌吸客

2、。3．6相差显微镜。3．7三角瓶。3．8玻片染色缸或染色盘。3．9载玻片。3．10液氮罐。3．11厚壁毛细管。3．12水浴器：25±1℃，37±1℃和42±1℃各一台。3．13酒精灯。3．14灭菌试管。3．15接种针。3．16试管架。4培养基和试剂4．1蛋白胨水：按GB4789.28中3.13规定。4．2Cary-Blair氏运送培养基：按GB4789.28中4.52规定。4．3改良Camp-BAP培养基：按GB4789.28中4.53规定。4．4Skirrow氏培养基：按GB4789.28中4.54规定。4．5氧化酶试剂：按

3、GB4789.28中3.18规定。4．63%过氧化氢液：按GB4789.28中3.20规定。4．71%甘氨酸培养基：按GB4789.28中4.56规定。4．830ug萘啶酸圆形滤纸片。4．9三糖铁培养基：按GB4789.28中4.26规定。4．10革兰氏染色液：按GB4789.28中2.2规定。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.9—19944．11TTC琼脂：按GB4789.28中4.55规定。4．12马尿酸钠培养基：按GB4789.28中3.9规定。4．13三氯化铁：按GB47

4、89.28中3.9规定。4．14快速硫化氢（H2S）试验琼脂：按GB4789.28中4.50规定。4．15DNA酶甲基绿琼脂：按GB4789.28中4.51规定。5检验程序空肠弯曲菌检验程序如下：6操作步骤6．1样品的采集及处理不论那种食物样品都应尽快交付检验。如果样品必须运送和保存，应当使用Cary-Blair半固体培养基。弯曲菌的存活时间取决于温度，在25℃情况下，其存活时间不到24h或更少，因此样品在厚始分离前需放冰箱或冷处保存。6．2微需氧条件的制备最佳微需氧条件是氧气为5%、二氧化碳为10%、氮气为85%。6．2．1

5、带有双相压力计（可表示正负压的）的厌氧罐：在装皿密封后，先抽4去罐内空气至负压7.3×10Pa（500mmHg）处，输入上述三种混合气体使罐内压4力恢复于零；再将罐内气体抽至负压7.3×10Pa（500mmHg），同样输入上述气体至零，即可放置温箱培养。6．2．2气袋法：操作时只使用气体发生剂而不加催化剂。6．2．3双平板法：取两块平板，一块平板接种已知的兼性厌氧菌（如变形杆菌），另一块平板接种样品去掉皿盖，将含琼脂的两只皿相对合齐并用胶布粘封，放入密封不漏气的罐内（或袋内）进行培养。由于兼性厌氧菌生长的代谢作用，可使小环境中

6、的氧气浓度下降和二氧化碳浓度上升。6．2．4蜡烛缸法将已接种细菌的平板置于容量2000mL的磨口标本缸或干燥器内。缸盖及缸口涂以凡士林，放入小段点燃蜡烛于缸内（勿靠近缸壁，以免烤热缸壁而炸裂），盖密缸盖。缸内燃烛约于0.5～1min，因氧减少自行熄灭，此时容器内约含二氧化碳5%～10%。最后连同容器一并置于42±1℃温箱中培养。6．3分离培养6．3．1拭子或液体可直接在选择性培养基如改良Camp-BAP布氏杆菌培养基或使用Skirrow氏培养基平板上划线接种。于42℃培养48h后，观察可疑菌落。6．3．2第一型菌落不溶血，灰色

7、、扁平、湿润、有光泽，看上去像水滴，有从接种线向外扩散的倾向；和二型菌落也不溶血，常呈分散凸起的单个菌落（1～2mm），边缘完整、发亮。6．4初步鉴定将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。本菌为革兰氏阴性菌，大小为0.3～0.4um×1.5～3um，呈S形、螺旋状或纺锤形。在固体培养基上培养时间过久或在不适条件下则常呈现球形菌。在暗视野中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.9—1994或相差显微镜下观察，动力明显。根据菌落生长特征、菌体染色、动力、氧化酶和

8、过氧化氢酶试验阳性者，可初步确定为弯曲菌。6．5确定鉴定经初步鉴定后，仍需做下述试验（以下各项试验均需在5%氧气的微需氧环境中培养）。6．5．1甘氨酸（glycine）耐受性试验：按种于甘氨酸培养基中，培养48h，如为阳性，在培养基表面有云雾状生长，则为弯曲菌空肠亚种。6．5