GB 4789.9-1994 食品卫生微生物学检验 空肠弯曲菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB食品卫生微生物学检验4789.9一94空肠弯曲菌检验储GB4789.9-84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofCampylobacterjejuni1主皿内容与适用范围本标准规定了空肠弯曲菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中空肠弯曲菌的检验。291用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1温箱:42士10C。3.2厌氧罐:带有双相压力表。3.3气袋法。3.4无菌平皿

2、。3.5灭菌吸管。3.6相差显微镜。3了三角瓶。3.8玻片染色缸或染色盘。3.9载玻片。3.10液氮罐。3.11厚壁毛细管。3.12水浴器:25士10C,37士1℃和42士1℃各一台。3.13酒精灯。3.14灭菌试管。3.15接种针。3.16试管架。4培养荃和试荆4.1蛋白陈水:按GB4789.28中3.13规定。4.2Cary-Blair氏运送培养基:按GB4789.28中4.52规定。4.3改良Camp-BAP培养基:按GB4789.28中4.53规定。4.4Skirrow氏培养基:按GB4789.28中

3、4.54规定。中华人民共和国卫生部1994一03一，8批准1994一09一01实施GB4789.9一944.5氧化酶试剂:按GB4789.28中3.18规定。4.63%过氧化氢液:按GB4789.28中3.20规定。4.71%甘氨酸培养基:按GB4789.28中4.56规定。4.830Kg蔡吮酸圆形滤纸片。4.9三糖铁培养基:按GB4789.28中4.26规定。4.10革兰氏染色液:按GB4789.28中2.2规定。4.11TTC琼脂:按GB4789.28中4.55规定。4.12马尿酸钠培养基:按GB4789

4、.28中3.9规定。4.13三氯化铁:按GB4789.28中3.9规定。4.14快速硫化氢(H2S)试验琼脂:按GB4789.28中4.50规定。4.15DNA酶甲基绿琼脂:按GB4789.28中4.51规定。5检验程序空肠弯曲菌检验程序如下GB4789.9一946操作步膝6.1样品的采集及处理不论那种食物样品都应尽快交付检验。如果样品必须运送和保存，应当使用Cary-Blair半固体培养基。弯曲菌的存活时间取决于温度，在25℃情况下，其存活时间不到24h或更少，因此样品在原始分离前需放冰箱或冷处保存。6.2

5、微需氧条件的制备最佳微需氧条件是氧气为5%、二氧化碳为10%,氮气为85%,6.2.1带有双相压力计(可表示正负压的)的厌氧罐:在装皿密封后，先抽去罐内空气至负压7.3X10'Pa(550mmHg)处，输入上述三种混合气体使罐内压力恢复于零;再将罐内气体抽至负压G84789.9一947.3X10'Pa(550mmHg),同样输入上述气体至零，即可放置温箱培养。6.2.2气袋法:操作时只使用气体发生剂而不加催化剂。6.23双平板法:取两块平板，一块平板接种已知的兼性厌氧菌(如变形杆菌)，另一块平板接种样品，去掉

6、皿盖，将含琼脂的两只皿相对合齐并用胶布粘封，放入密封不漏气的罐内(或袋内)进行培养。由于兼性厌氧菌生长的代谢作用，可使小环境中的氧气浓度下降和二氧化碳浓度上升。6.2.4蜡烛缸法将已接种细菌的平板置于容量2000mL的磨口标本缸或干燥器内。缸盖及缸口涂以凡士林，放入小段点燃蜡烛于缸内(勿靠近缸壁，以免烤热缸壁而炸裂)，盖密缸盖。缸内然烛约于。.5-1min,因氧减少自行熄灭，此时容器内约含二氧化碳5%-l00o。最后连同容器一并置于42士1'C温箱中培养。6.3分离培养6.3.，拭子或液体可直接在选择性培养基

7、如改良Camp-BAP布氏杆菌培养基或使用Skirrow氏培养基平板上划线接种。于42℃培养48h后，观察可疑菌落。6.3.2第一型菌落不溶血，灰色、扁平、湿润、有光泽，看上去像水滴，有从接种线向外扩散的倾向;第二型菌落也不溶血，常呈分散凸起的单个菌落(直径为1^-2mm)，边缘完整、发亮。64初步鉴定将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。本菌为革兰氏阴性菌，大小为。.3-0.4jamXl.5^-3pm，呈S形、螺旋状或纺锤形。在固体培养基上培养时间过久或在不适条件下则常呈现球形菌

8、。在暗视野或相差显微镜下观察，动力明显。根据菌落生长特征、菌体染色、动力、氧化酶和过氧化氢酶试验阳性者，可初步确定为弯曲菌。6.5确定鉴定经初步鉴定后，仍需做下述试验(以下各项试验均需在5%氧气的微需氧环境中培养)。6.5.1甘氨酸(glycine)耐受性试验:接种于甘氨酸培养基中，培养48h，如为阳性，在培养基表面有云雾状生长，则为弯曲菌空肠亚种。6.5.2硫化氢生长试验:接种于TSI斜面上，并吊