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时间:2021-11-07
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1、------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxpH对酶活性的影响【精品文档】实验pH对酶活性的影响和最适pH的测定一、实验目的1、了解pH对酶的活性的影响机理;2、掌握如何选择酶催化反应的最适pH和获得最适pH条件的确定。二、实验原理酶的生物学特征之一是它对酸碱的敏感性,这表现在酶的活性和稳定性易受环境pH的影响。pH对酶的活性的影响极为显著,通常各种酶只在一定的pH范围内才表现出活性,同一种酶在不同的pH值下所表现的活性不同,其表现活性最
2、高时的pH值称为酶的最适pH。各种酶在特定条件下都有它各自的最适pH。在进行酶学研究时一般都要制作一条pH与酶活性的关系曲线,即保持其他条件恒定,在不同pH条件下测定酶促反应速度,以pH值为横坐标,反应速度为纵坐标作图。由此曲线,不仅可以了解反应速度随pH值变化的情况,而且可以求得酶的最适pH。三、实验器材与试剂1、试剂:磷酸氢二钠、乙酸钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、乙酸。2、器材:可见分光光度计、恒温水浴锅、试管、酸度计四、操作步骤1.配置缓冲溶液按下表配置缓冲溶液,其溶液pH值以酸度计测定值为准。管号0.2mol/L磷酸氢二钠(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)缓冲液pH12345
3、【精品文档】【精品文档】61.反应液的配方准备二组各6支试管,第一组6支试管中,在每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液,然后加入一定量浓度的6.5%蔗糖酶溶液1.0ml(此时的蔗糖酶只能用H2520。另一组6支试管也是每支都加入4.5ml上表中相应的缓冲液,但不再加酶而加入等量的去离子水,分别作为测定时的空白对照管。所有的试管都用水补足到5.0ml。2.终止反应所有的试管按一定时间间隔加入0.5ml蔗糖(6.5%)开始反应,反应5min后分别加入5.0ml0.1mol/LNaOH溶液,在按测定酶活力的程序操作,测出A520 。三、结果与分析-1)为纵坐标,以pH为横坐标,绘制下蔗糖
4、酶活性与pH的关系曲线。分析曲线并确定蔗糖酶的最适pH或pH范围。【精品文档】
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