免疫化学诊断技术的分类与局限.pptx

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1、免疫化学診斷技术的进展AutomatedChemiluminescenceSystem利用抗原抗体反应和分离技术测定(量)与疾病有关的化学分子。免疫化学診斷技术免疫同位素标记測定法化学发光法酶联化学发光偏振荧光时间分辨荧光电化学发光直接化学发光免疫化学診斷技术的分类免疫同位素标记測定法放射免疫法已有30多年历史。比较其它传统的方法，它有特异性好，灵敏度高，准确性好，可靠性强等特点，故在临床科研上广泛使用。免疫同位素標記法之局限半衰期短；試劑批內与批間差异大；反應過程長；靈敏度有限；放射性廢物的處理；免疫化学发光法酶联化学发光偏振荧光时间分辨荧光电化学发光直接化学发光免疫化

2、学发光法简介-酶联化学发光(EMCLIA)原理：抗体包被的塑料固相加入待测样本-抗原加入碱性磷酸酶标记的抗体洗加入底物-4-Mup,发光产品：雅培Axsym,梅里埃Vidas,强生Vitros,DPCImmulite2000,罗氏ES300原理：標記在小分子抗原上的熒光素經485nm的激發偏振光照射後，發出光子，經過偏振儀形成525~550nm的偏振光；這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈反比，游離的熒光素標記抗原，分子小，轉動速度快，激發後發射的光子散向四面八方，因此偏振光信號弱；在測定過程中待測抗原小分子，熒光標記抗原小分子和特導性沆體大分子同時加入到一反

3、應杯中，待測抗原越少，與抗體競爭結合的量越少，而熒光標記抗原與抗體結合就越多，而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後，其分子的轉動速度減慢，由此熒光偏振信號強。产品：雅培Axsym免疫化学发光法简介-偏振荧光(FPIA)原理：标记物为三價稀土離子如：銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鏑(Dy3+)和鋱(Tb3+)等，它們可利用具有雙功能基團結構的螫合劑，在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合，形成稀土離子—螫合劑—抗原結合物。當標記稀土離子的抗原與待測抗原共同與抗體競爭結合，形成抗原抗體免疫復合物，其中含有標記稀土離子，然後利用時間分辨熒光分析儀，可測出復合物中稀土離子發射熒

4、光的強度，以此確定待測抗原的含量。产品：EG&G的DELFIA免疫化学发光法简介-时间分辨荧光(TRFIA)原理：先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑[Ru(bpy)3]2+標記在特异性抗體上。將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體共同溫育，形成磁性微珠包被抗體—抗原—發光劑標記杭體復合物。加入TPA緩沖液和TPA在電極表面進行電子轉移，產生電化學發光。产品：罗氏Elecsys免疫化学发光法简介-电化学发光(ECLIA)免疫化学发光法简介-直接化学发光(CLIA)原理：利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的測定方法。以丫啶酯為發光的標記物，固相載體為

5、極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾心法和競爭結合法相似。單克隆抗體或抗原包被磁性微粒抗原抗體結合，洗滌分離加入氧化劑發光：經過加入氧化劑（H2O2）和pH糾正液（NaOH）使成鹼性，這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發光，集光器和光電倍增管接收。記錄5秒鐘內所產生的光子能。产品：拜耳ACS:180SE,AdviaCentaur,AdviaIMS全自動化學發光系統拜耳ACS(AutomatedChemiluminescenceSystem)免疫化学发光法简介-直接化学发光(CLIA)直接化學發光的机理-ACRIDINEESTER丫啶酯最簡易最快速非

6、常稳定；与抗体或抗原结合不影响发光；N+CH3BrCOOCH3CH3R丫啶酯：在pH>10时，快速充分释放光子。丫啶酯-ACRIDINEESTER不需催化劑穩定性高產光強線性好本底低反應快結合后不影響發光靈敏度高-可達10-15摩爾直接化學發光的机理丫丫啶啶酯酯一一秒鐘直直接接閃閃光光，，強強度度是是碘碘125125在在一一分分鐘鐘發發出出光光子子的的十十万万倍倍06.05.02.01.00200,000400,000600,000800,0001,000,0003.04.0秒100200300400500600直接閃光慢發光光強度直接化學發光的机理直接閃光慢發光直接化學

7、發光的机理由于超低本底,,直接化學發光具有高靈敏性TracerConcentration(moles/L)sensitivitylimitoffluorescencesensitivitylimitofchemiluminescenceFluorescenceBackgroundNoiseLevelChemiluminescenceBackgroundLevel1010998877665544332211001010-15.51010-171010-161010-151010-141010-131010-121010-1010