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《红树林根际解磷菌分离培养及解磷能力的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、红树林根际解磷菌分离、培养及解磷能力的研究摘要:本实验从红树林根际分离出不同种类的解磷细菌,经过筛选获得一株解磷能力较强的菌株ZB0211,在纯培养的条件下,对这株解磷菌进行最适培养条件试验。结果表明:碳源以10g#kg-1的蔗糖最佳,氮源以1g#kg-1NH4Cl最好,10g#kg-1NaCl浓度为最适生长浓度,最适初始pH值为715。同时进行的解磷能力实验也表明pH值、菌数与解磷能力这三者之间存在一定的相关性。关键词:红树林;解磷细菌;分离;培养条件;解磷强度磷是植物生长发育所必需的重要营养元素之一,但是土壤中的磷绝大部分呈有机或无机磷化物状
2、态,植物不能直接吸收,解磷菌能将植物难以吸收利用的磷转化为植物可吸收利用的磷[1],因此,利用微生物的解磷作用弥补土壤磷素营养的不足,成为当前国内外非常关注的研究课题。本研究试图利用微生物改善红树林土壤中磷素缺乏问题。红树林是生长在热带亚热带海岸潮间带,受到海水周期性浸淹的木本植物群落。由于间隙水富含阳离子,磷酸盐通常沉淀在底泥中,致使大量的磷元素不能被红树林直接利用[2],影响红树林的生长,所以提高磷素利用率对促进红树植物生长有重要意义。本研究从红树林根际分离不同种类的解磷菌,并进行培养条件及解磷能力的研究,为红树林人工接种解磷菌提供优良菌株与
3、培养技术。1材料与方法111红树林根际解磷菌株的分离从湛江高桥红树林保护区内采集红树植物根系,主要包括白骨壤(Avicenniamarina(Forsk1)Vierh1)、无瓣海桑(SonneratiaapertalaBuch1-Ham)和木榄(Bruguieragymnorrhiza(L1)Lamk),用无菌胶袋装好带回实验室。在实验室内把附着在根表面的土抖掉,在流水下轻轻冲洗干净后,再用无菌水冲洗5~8次,用消毒灭菌过的解剖刀切成015~110cm的根段,分别置于装有50mL改良SRSM培养液的三角瓶中,在28~30e摇床培养5d(190r#
4、min-1)。随后取样稀释涂平板,挑取典型菌落进一步纯化培养[3]。112解磷菌的培养培养基采用改良的SRSM无机磷培养基[4]。采用液体振荡培养法(190r#min-1),培养温度为28~30e,培养时间3~5d。113解磷菌数量测定方法采用比浊法。将培养好的菌液在721型分光光度计上比色,以600nm的光密度值(OD值)作为解磷菌密度指标。114解磷能力的测定11411液体解磷能力测定将不加磷源的改良SRSM液体培养基100mL分装在250mL三角瓶中,1@105Pa,30min灭菌,接种前精确加1g灭菌Ca3(PO4)2粉,接种量4%,29
5、~31e,190r#min-1摇床培养36h,9500r#min-1离心5min,上清液用磷钼兰比色法[5]测定水溶性磷含量,以水溶性磷含量占Ca3(PO4)2粉全磷含量的百分比作为磷细菌的磷素转化率。每株菌3次重复。11412固体解磷能力测定将筛选出的解磷能力较强的菌株,摇床培养24h后的菌液适当稀释后分别涂在装有15mL固体SRSM培养基的平板上,30e恒温培养72h,观测解磷透明圈大小。11413pH值、菌数以及解磷能力动态测定每隔6h取样测定培养液的pH值、菌数和水溶性磷含量。磷素转化率的测定方法同上,pH值用pHS-3C型酸度计直接测定
6、,菌数的测定采用稀释平板法。115培养条件的研究基础培养基用111g#kg-1K2HPO4可溶性磷源替换改良SRSM培养基的原有磷源。以下试验每组处理均进行3次重复。11511碳源试验去掉基础培养基中原有的碳源,分别添加10g#kg-1的葡萄糖、蔗糖、淀粉3种试验碳源。11512氮源试验去掉基础培养基中原有的氮源,分别添加1g#kg-1的NH4Cl、(NH4)2SO4、酵母提取物以及酪蛋白水解物。11513pH值试验采用基础培养基,灭菌前将pH值调至510、610、615、710、715、810。11514NaCl试验基础培养基中的NaCl浓度分
7、别为5、10、15、20、25、30g#kg-1。2结果与分析211解磷菌分离结果表1对分离菌株(10株)及引进的墨西哥红树林菌株(3株)的材料来源地、宿主植物和菌落特征进行了描述。分离菌株来自三种宿主植物,菌落大都呈圆形或近圆形,表面光滑,质地松软,其中ZB0211、ZB0212、ZB0204和ZW0405生长快,筛选优良菌株时可优先考虑。212解磷能力的比较13株解磷菌的解磷能力见表2。从表2看出,供试菌株对磷的平均转化率为0106%~8101%,方差分析表明不同菌株的转化率之间差异显著,经LSR分析可知其中菌株ZB0211的解磷能力最强,其
8、转换率为8101%,ZM0609菌株的解磷能力最弱,其转化率为0106%。比较后,初步筛选出解磷能力强的优良菌株ZB0211。90林业科
