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时间:2018-01-21
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1、贺顺龙:采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响目录摘要1前言11材料与方法21.1材料21.2方法21.2.1病原菌的分离、纯化和保存21.2.2孢子悬浮液的制备21.2.3硅酸钠浸泡处理果实21.2.4损伤接种31.2.5取样方法31.2.6丙二醛(MDA)含量测定31.2.7细胞膜完整率的测定31.2.8细胞膜微膜囊提取、NADPH氧化酶和Ca2+-ATPase活性的测定41.2.9脂氧合酶(LOX)活性测定41.2.10蛋白含量测定51.2.11数据统计52结果与分析52.1硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜完整率及MDA含量的影响
2、516贺顺龙:采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响2.2硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜NADPH氧化酶和Ca2+-ATPase活性的影响62.3硅酸钠处理及挑战接种对果实脂氧合酶(LOX)活性的影响73讨论7参考文献9致谢10采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响摘要:本文研究了100mM硅酸钠采后处理和粉红单端孢(Trichotheciumroseum)挑战接种对对“银帝”厚皮甜瓜果实细胞膜部分氧化还原体系的影响。结果表明:硅酸钠处理明显延缓了甜瓜果实细胞膜完整率的降低,处理后第4d高于同期对照20.7%;明显提
3、高了果实细胞膜NADPH氧化酶,挑战处理后第10d高于同期对照82.4%;延缓了脂氧合酶(LOX)活性的升高,处理后第6d活性低于同期对照10.9%;丙二醛(MDA)含量有所增加,处理后第10d高于同期对照44.8%。关键词:硅酸钠果实细胞膜16贺顺龙:采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响前言甘肃省是我国厚皮甜瓜的主要产区之一,甜瓜营养丰富、甘甜爽口、风味独特,深受大众喜爱。然而,由于其产期集中,且正值高温季节加之缺乏必要的冷链和有效的包装,采后腐烂颇为严重,造成厚皮甜瓜采后腐烂的主要病害包括黑斑病、白霉病、软腐病、粉霉病等[1]。果
4、蔬采后病害发生的重要原因是受到病原物侵染时,细胞的膜结构和特性将发生改变,从而引起代谢失调,最终导致细胞死亡。质膜NADPH氧化酶是一种以胞质NADPH为电子供体,催化胞外O2生成超氧阴离子的氧化还原酶,通过催化产生AOS,细胞质内Ca2+增加会促进植物组织乙烯合成并加速这些组织的衰老[2-3]。质膜和细胞器外膜的Ca2+-ATP酶能够把细胞质过多的Ca2+转运到细胞外或细胞器贮藏起来。另外LOX能催化多元不饱和脂肪酸发生过氧化作用,LOX及其氧化物可能直接参与了植物组织的衰老过程。有报道表明硅可以有效降低厚皮甜瓜的采后病害[4-7]。但是对其作用机理的
5、探讨主要集中于硅酸钠处理对POD、PAL和CHT活性的影响,但是对细胞膜相关物质含量(MDA)及酶(NADPH氧化酶、LOX和Ca2+-ATPase)活性的影响鲜有报道。本实验以厚皮甜瓜为试验材料,研究硅酸钠处理对细胞膜相关物质含量及酶活性的影响,探讨其降低采后病害的机理,以其为硅的进一步扩大使用提供理论依据。16贺顺龙:采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响1材料与方法1.1材料供试“银帝”甜瓜采自甘肃民勤县收成乡露天栽培大田中,花后45天采收。单果套发泡网袋后入标准包装箱(6个/箱)当天运抵实验室后在常温条件下(22±2℃;RH55
6、-60%)贮藏待用。硅酸钠由天津市科密欧化学试剂开发中心生产,分析纯。1.2方法1.2.1病原菌的分离、纯化和保存参照方中达法(1998)。采集典型粉霉病(T.roseum)发病甜瓜果实,用70%酒精表面消毒后切取病健交界处组织,经表面消毒后移至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上,于25℃保温培养。待菌落形成后采用稀释法进行单孢分离、纯化。纯化菌株经回接试验确定其致病力后于斜面PDA上4℃下保存待用。1.2.2孢子悬浮液的制备参照Bietal.(2006)方法。取25℃下培养10天的带菌PDA平皿一个,加入含0.05%Tween20的无菌水约10mL,用
7、玻璃棒刮下平板上的病原菌孢子,然后转入50mL三角瓶中,在WYX-A微型旋涡混合器上振荡15秒,再用双层纱布过滤,滤液用血球计数板计数算出孢子悬浮液的浓度后,最后稀释至所需浓度,1×106个/mL。1.2.3硅酸钠浸泡处理果实硅酸钠诱导处理:将表面用自来水冲净并晾干的果实浸入16贺顺龙:采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响100mM的硅酸钠溶液中(内含0.05%的Tween80)10min,取出晾干后,单果套发泡网袋,入包装箱(6个/箱),于常温(22±2℃;RH55%-60%)下贮藏供接种之用。以清水(内含0.05%的Tween80
8、)处理作对照。1.2.4损伤接种参照毕阳和张维一(1993)方法并修改[8]。选
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