生物技术本科毕业论文-pcr方法在apoe基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用

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1、湖北中医药大学本科生毕业论文题目：PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用姓名：学号：专业：生物技术年级：2008级实习单位：武汉大学心血管病研究所指导老师：完成日期：2012年5月1日PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用作者肖明瑶指导者张艳摘要目的为ApoE基因敲除鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型ApoE基因和ApoE缺陷突变基因的DNA片段，用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度，然后用PCR鉴定方案检测小鼠基因型并将所得基因型结果与已经过经典的Southernblo

2、t方法检测得到的基因型结果比较。结果野生型仅在155bp处有一条条带，突变纯舍子仅在245bp处有一条条带，杂合子则在155和245bp处出现两条条带。用PCR方法获得的ApoE基因分析结果与经典的Southernblot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析ApoE基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。关键词聚合酶链反应基因型基因打靶载脂蛋白EGenotypeidentificationofApoEGeneKnockoutMicewithPolymeraseChainReactionObjectiveT

3、hisstudywastoexploreasimpleandquickpolymerasechainreaction（PCR）methodforgenotypingofApoEknockoutmice.MethodTwopairsofprimersweredesignedtoamplifygenomicDNAfragmentofwild-typeApoEgeneandthesameregiononApoEtargetingveceorrespectively.AgradientPCRstrategywasusedtotest

4、thebestannealingtemperature.ResultsA155bpbandwasfoundinwild-typeApoEmice,a245bpbandinhomozygousmutatedApoEmiceandbothbandsinhetemzygousmice.ThegenotypingresultswerecompletelycoincidedwiththosefromtypicalSouthernblot.ConclusionPCRisasimple,fastandpracticalmethodfort

5、hegenotypingofApoEgeneknockoutmice.KeywordsPoiymeraseChainReactiongenotypegenetargetingApoE载脂蛋白(apolipoprotein，ApoE)是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体，因此，缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆同醇的物质积累而更加容易引起动脉粥样硬化(atl-rosclerosis，AS)病灶形成。ApoE基因敲除小鼠亦称ApoE基因缺陷小鼠，由美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱那大学病理遗传实验室应用胚胎

6、干细胞基因敲除(geneknockout)技术于1992年培育成功；这种小鼠无论正常或高脂饮食均可形成严重的高脂血症及AS病灶。此后，各国学者利用ApoE基因敲除小鼠在高脂血症及AS的发病机理和治疗措施等方面做了许多卓有成效的研究。为了深入研究基因敲除小鼠表型的改变，基因敲除动物在用于实验研究前，必须准确、及时地进行基因型鉴定。由于需要鉴定的动物数量多，工作量大，而传统的Southernblot方法费时、昂贵，又涉及同位素可能对环境的污染，不便于进行大规模的动物筛选。我们采用聚台酶链反应(poiymerasechainrea

7、ction，PCR)技术分析ApoE基因敲除小鼠基因型，旨在为ApoE基因敲除鼠的基因型鉴定探索一种快捷、准确和廉价的方法，并为其他基因敲除动物的基因型鉴定提供参考。材料与方法1.材料1.1ApoE基因敲除小鼠1.2仪器PCR仪（BIOMETRAT-GRADIENTTHERMOBLOCK、BIONEER）电泳仪（BIO-RAI）、离心机（SIGMA1-14ED）、离心机（SIGMA1-14ED）BIO-RAD凝胶成像系统1.3试剂GOTAGSYSTEM（PROMEGA）、引物（上海生工）、10*TBE缓冲液(???)、琼脂糖

8、、marker（NEB）、EB、宝生物LATaq酶、蛋白酶K（Promega）tris-HCL（Amresco分装）、EDTA(Amresco分装)、SDS（国药集团化学试剂有限公司）2.实验方法2.1PCR引物设计：以正常野生型小鼠ApoE基因组DNA序列为模板，设计第一对引物oIMR0