《病毒滴度的测定》PPT课件

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病毒滴度的测定 原理(重点)：适当稀释的病毒悬液与长成单层的宿主细胞混合，在细胞上覆以营养琼脂培养基等固体或半固体介质，由于琼脂的限制，病毒只能感染并破坏临近的细胞，造成细胞溶解而形成空斑，每个空斑由一个病毒颗粒造成，计算空斑数量再乘以稀释倍数即可得知原来的病毒感染单位的浓度。空斑形成单位法测定病毒滴度空斑形成单位（PlaqueFormingUnits,PFUs) 空斑显现原理(掌握)：空斑形成后，经中性红活细胞染色，活细胞显示红色，而空斑区细胞不着色，形成不染色区域。空斑形成单位法测定病毒滴度 Procedures 适用条件(熟悉)：凡是能在细胞中产生细胞病变效应(CPE)的病毒都可以采用空斑形成法测定病毒滴度。空斑形成单位法测定病毒滴度 中性红(掌握) (熟悉) (了解) (了解)空斑形成单位试验技术举例p51-52防止琼脂凝固；Hanks液？双抗？5%CO2 空斑形成单位的计算(重点) (掌握) (熟悉) CCID50ID50LD50(重点) (熟悉) 5%CO2培养箱(熟悉) CCID50TCID50(熟悉) 病毒液CPE孔数无CPE累计出现CPE孔稀释度孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180270100（27/27）10-280190100（19/19）10-37111191.6（11/12）10-4354640（4/10）10-5171130.7（1/14）10-6080210（0/21）Reed-Muench法计算CCID50CPE(阳性)孔累计数由下向上累积无CPE(阴性)孔累计数由上向下累积(难点、重点) CCID50(难点、重点) CalculationofTCID50UseofReed&Muenchmethod(if50ulofvirusdilutionisaddedtoeachwell) Karber法计算CCID50病毒液稀释度出现CPE孔的比率10-18/8=110-28/8=110-37/8=0.87510-43/8=0.37510-51/8=0.12510-60/8=0(难点、重点) lgCCID50=L+d(s-0.5)L:病毒的最低稀释倍数的对数L=lg10-1=-1d：稀释系数，即组距d=lg10-1=-1S：CPE(阳性)孔比率总和lgCCID50=(-1)+(-1)×(3.375-0.5)=-3.875CCID50=10-3.875/0.1ml ID50和LD50的计算与CCID50完全相同(掌握)lgCCID50=L+d(s-0.5)ID50计算，S：感染比率总和；LD50计算，S：死亡比率总和； (掌握) 血凝试验的基本原理(掌握)红细胞凝集现象(血凝现象)红细胞凝集抑制(红细胞与抗体结合，失去血凝)血凝滴度/血凝单位血凝试验测定病毒滴度 干扰滴定测定病毒滴度 小结主要介绍空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的原理及其方法；重点要掌握空斑形成单位法、50%终点法测定病毒滴度的原理及其滴度的计算；熟悉：空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的具体方法；