使用tcid50法测定病毒滴度

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1、半数组织培养感染剂量法测定淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒优势分析连亨宁成都军区总医院呼吸内科，成都610083摘要：目的寻找简便的淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒LCMV病毒滴度测定方法。方法采用半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测LCMV病毒滴度，记录期间细胞形态变化。结果实验后第5天获得与空斑实验一致的病毒滴度结果,但实验流程更为简单。结论TCID50法测定LCMV病毒滴度相对于空斑实验更为简便。关键词：半数组织感染剂量；空斑实验；淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒；病毒滴度中图分类号：Q939.47文献标识码：ATheadvantageofLym

2、phocyticChoriomeningitisVirusquantificationby50%TissuecultureinfectivedoseLianHengning（DepartmentofRespiratoryMedicine，ChengduMilitaryGeneralHospital，Chengdu610083）Abstract：TodetermineaconvenientmethodtoquantifyLymphocyticChoriomeningitisVirus(LCMV),LCMVtiterwasmeasured

3、bythe50%Tissuecultureinfectivedose(TCID50)method.Theresultwasgot5dayspost-infection,similarwithplaqueassay,buttheprotocoliseasierthanplaqueassay.ThisexperimentshowdthatTCID50ismoreconvenientthanplaquesassay.Keywords:50%Tissuecultureinfectivedose(TCID50);Plaquesassay;Lym

4、phocyticChoriomeningitisVirus(LCMV);Virustiter空斑实验是检测病毒滴度最为经典的方法[1]。其原理为将病毒充分稀释后感染细胞，使用琼脂培养基将病毒感染局限于固定区域，若干天后病毒感染造成的细胞病变会形成空斑，1个空斑被认定为由1个病毒感染、扩散所致，由计算病毒滴度，其单位为PFU/ml（空斑形成单位）。TCID50法测定病毒滴度原理为，取出X体积病毒液感染组织，该X体积病毒液中有50%可能含有病毒，从而使组织发生感染。X的倒数即为病毒滴度，其单位为TCID50/ml[2]。TCID50法基于

5、泊松分布的统计学原理，与空斑实验的换算关系为0.69TCID50/ml≈1PFU/ml。空斑实验测定的病毒滴度更为精确，而TCID50法所得数据更为可信、稳定。两种方法均为病毒滴度测定的常用方法，空斑实验运用更多，TCID50法则多用于细胞病变效应不明显的病毒滴度测定，如人免疫缺陷病毒（HIV）。淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）是进行T细胞耗竭研究的常用工具[3]，其滴度测定多采用空斑实验。本研究选择TCID50法测定病毒滴度，通过与空斑实验进行比较，其结果相近，但更为简便。1材料与方法：1.1材料已知病毒滴度的LCMV病毒原液（

6、第三军医大学万瑛教授馈赠，由空斑实验测定滴度1.3X107PFU/ml），乳仓鼠肾细胞（BHK21细胞），细胞培养所需1640培养基（含5%胎牛血清、1%青链霉素、1%谷氨酰胺）均为Hyclone公司产品，96孔板（Corning），相差显微镜（奥林巴斯）；locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisC

7、arpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame1.2TCID法病毒滴度测定BHK21细胞在培养瓶中生长至细胞密度80%时收获细胞，按每孔15000个细胞铺板，共6X8个孔，每孔含100μl培养基；随后加入病毒稀释液，病毒原液使用培养基10倍梯度稀释，每个孔中加入100μl病毒稀释液，每个梯度浓度加5个孔，共8个梯度，设8个孔为阴性对照，加入100μl培养基。板布局见图1；1.3病毒滴度计算方法观察细胞病变的孔的数目及其所在病毒液浓度，使用Reed-Muench法计

8、算病毒滴度，与空斑实验所得结论进行比较。图1板布局，数字代表每行病毒原液稀释倍数Fig1Plate,thenumbersmeanthedilutionfoldofthevirus2结果每日使用相差显微镜观察平板，如图2所