银杏叶中银杏黄酮树脂分离对比实验(设计)

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1、银杏叶中银杏黄酮树脂分离对比实验近年来,整个世界特别是西方发达国家掀起了一阵绿色浪潮。国际上渐渐形成了一种共识---得自绿色生命(植物)的产品往往具有较大的安全性。银杏作为近代植物药开发研究的热点之一,正处于这一浪潮的前沿。银杏树为银杏科植物银杏(Ginkgobiloba.L.)又名公孙树,为我国特产植物.银杏叶提取物(GRE)主要含黄酮,内酯两类活性成分,黄酮以山柰酚(kaempferal),槲皮素(quercetin),异鼠李素(isorhamnetin)的甙类化合物为主,内酯以白果内酯及银杏内酯A.B.C(gimkgolideA.B.C)为主。银杏黄酮具有捕获游离基,抑制血小板活化因子(

2、PFA)扩张冠动脉血管,增加心脑血量等功效。可用于治疗由于血管老化,脑血管供血不足所导致的外周循环不良,眩晕,耳鸣,头痛失眠,短期记忆不良听力障碍,精神不振等,同时,还可以用于研制营养口服液,保健食品与化妆品,其应用日益广泛有关银杏提取方法报道很多,德国首先提出银杏制剂含量的质量标准:黄酮糖甙≥24%萜内酯≥6%和白果酸≤2×10-6。为了是银杏产品能出口创汇,参加国际市场的大循环,不断探索新的提取方法工艺,研究并选择出简单且高效的工艺方法以成为这个领域的焦点。目前有关银杏叶的提取工艺主要以乙醇为提取溶剂，我们以银杏黄酮和内酯为目标，对其银杏黄酮、内酯进行了正交提取工艺研究，确定了最佳提取工艺

3、，本次实验用最佳提取工艺得到的提取液进行大孔吸附树脂吸附分离对比实验研究，以期为银杏叶银杏黄酮、内酯大孔吸附树脂分离找到最合适的树脂，为银杏叶银杏黄酮的开发利用提供科学依据。1材料与仪器　　1.1材料银杏叶(采自陕西略阳)，自然干燥，粉碎。　　1.2试剂银杏黄酮对照品(含量≥98%)：购自Sigma公司;银杏内酯对照品(含量≥98%)：购自Sigma公司;大孔树脂LX-38C、D101，DM130购自西安蓝晓科技新材料股份有限公司。试剂均为分析纯。　　1.3仪器电热恒温水浴锅(H·H·S21-6C，上海医疗器械五厂);电子分析天平(FC204，上海精科实业有限公司);UV-762紫外可见分光光

4、度计(上海精密科学仪器有限公司);旋转蒸发器(上海亚蓉生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵，索式提取器，电热鼓风干燥箱;植物粉碎机(FZ102，天津市泰斯特仪器有限公司)2方法2.1银杏叶银杏黄酮、银杏内酯的薄层检测银杏叶银杏黄酮的薄层检测硅胶薄板制作称取4g硅胶G置于研钵中，加入0.5%的羧甲基纤维素钠溶液12ml，研磨15min后铺于20×10cm的干净玻璃平板上，要求平整无气泡，然后晾干即可。展开剂配制取展开剂氯仿-甲醇-乙酸乙酯按2：1：1的比例配制60ml（30：15：15）作为展开剂。薄板活化：将制好的硅胶薄板在105℃下活化30min。点样：点样点距板子底端1.5cm左右

5、，所有点样点位于同一直线上，尽可能向中间靠拢，每个点样点点样约20μl，点样点尽可能小。饱和：将板子不没入层析缸内的展层剂中，在展层剂的蒸气中饱和约0.5h。层析：将板子下端插入展层剂中进行展开，当展层剂前沿距板子上端约1.5cm时取出板子，自然晾干。观察：展开取出晾干后，喷5%AlCl3的乙醇溶液，热风吹干、并在365nm荧光灯下观察。Rf。银杏叶银杏内酯的薄层检测硅胶薄板制作称取4g硅胶G或硅胶GF254置于研钵中，加入0.5%的羧甲基纤维素钠溶液12ml，研磨15min后铺于20×10cm的干净玻璃平板上，要求平整无气泡，然后晾干即可。展开剂配制取展开剂甲苯-丙酮按7：3的比例配制50m

6、l（35：15）作为展开剂。薄板活化：将制好的硅胶薄板在105℃下活化30min。点样：点样点距板子底端1.5cm左右，所有点样点位于同一直线上，尽可能向中间靠拢，每个点样点点样约20μl，点样点尽可能小。饱和：将板子不没入层析缸内的展层剂中，在展层剂的蒸气中饱和约0.5h。层析：将板子下端插入展层剂中进行展开，当展层剂前沿距板子上端约1.5cm时取出板子，自然晾干。观察：先喷细水雾定位后170℃加热30分钟，若有银杏内酯存在，在波长254nm下出现苍黄色荧光斑点，银杏内酯B的Rf=0.23左右。2.2络合分光光度法测定银杏黄酮的含量a.标准曲线的制备精确秤取芸香叶甙rutin（芦丁）30mg

7、，用30%乙醇溶液溶解并定容至100ml（含量为0.30mg/ml）分别吸取标准液1、3、5、7、9ml于25ml容量瓶中，用30%乙醇补充至12.5ml,加入0.7mlNaNo2(1:20),摇匀，放置5分钟后，加入0.7mlAl(No3)3(1:20),6分钟后加入5ml1mol/L的NaoH溶液并摇匀,用30%的乙醇补充至刻度线,10分钟后于510nm进行比色测定。用UV-265可记录分光光