实验三 化学因子对细菌生长的影响

《实验三 化学因子对细菌生长的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、实验三化学因子对细菌生长的影响实验目的1、了解化学因素对微生物生长的影响，学会用单因子分析法确定化学因子影响微生物生长的条件。2、学会分光光度计法测定微生物细胞生长数。3、学会用连续法测定细菌的生长曲线。实验原理1、微生物生长受到多种因素的影响，其中一些化学因素影响到发酵液成分，同时可能改变微生物的代谢途径。本实验采用向培养液中加入一定浓度中草药煎剂，观察枯草芽孢杆菌生长情况。2、一定量的微生物接种到合适的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的对数为纵坐标，以生长时间为横坐标，做出的曲线呈生长曲线。实验材料枯草杆菌悬液（培养6小

2、时）、牛肉膏蛋白胨液体培养基、500ml三角瓶、5ml无菌吸管、无菌生理盐水、计数板、显微镜、恒温摇床。实验方法1、中草药煎液的制备：准确称取扶正解毒散200g，分别按1:5加入1000ml蒸馏水浸泡1小时，加热煎煮（武火煮沸，文火保持90min）后，用8层纱布过滤得滤液。然后再取滤渣加500mL蒸馏水浸泡30min后煎煮30min后，过滤得滤液，两次滤液混合后，加热浓缩至200mL，定性滤纸过滤，将此浓度视为100%，煎煮过程中不断搅拌使药液混匀。2、试验分组与含不同浓度中草药的液体培养基的制备按表2.1配制不同浓度的中草药液体培养基

3、，每个浓度分装至2个250mL三角瓶中，每个三角烧瓶装量为40ml.121℃加压灭菌20min，冰箱保存备用。表2.1不同浓度中草药液液体培养基的配方（单位：mL）组别和中草药液浓度配制总量ml加药液量ml加水量ml浓缩培养基量ml对照组0%2000100100第一组5%2001090100第二组10%2002080100第三组15%20030701003、接种用无菌接种技术接种3ml已培养6小时的菌悬液于装有40ml液体培养基的摇瓶中，每组接种2个摇瓶，震荡使菌种混匀。2、培养将接种的摇瓶置于摇床上，37度恒温培养，摇床转速为180-

4、200rpm培养，培养时间为24小时。3、生长量测定于培养结束后，从培养液中吸取2ml至离心管，用生理盐水洗涤三次，最后用1.8ml生理盐水将菌体混匀，以生理盐水为对照，测定OD600值。每个三角烧瓶取三个样。洗涤时离心机转速为3000rpm,离心时间5min/次。实验结果记录数据记录组别和中草药液浓度瓶1透光率瓶2透光率样1样2样3样1样2样3对照组0%第一组5%第二组10%第三组15%实验用品250ml无菌三角瓶8*5+2（每瓶含40ml培养基）、5ml无菌吸管5*10支、干燥离心管5*10支，可调转速摇床三台，离心机3台，紫外分光

5、光度计2台。