实验三细菌的分布与外界因素对细菌的影响

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1、细菌的分布与外界因素　　　　对细菌的影响右江民族医学院微生物与免疫学教研室实验目的１.掌握皮肤消毒方法．２.掌握标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ）的原理、操作方法、结果的判读与解释及临床意义．３.掌握纸片扩散法的质量控制方法．４.熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法．５.熟悉紫外线灭菌方法．６.了解空气、水中细菌的检查方法．７.了解高压蒸汽灭菌方法．试验内容一、细菌的分布检查１.空气中细菌的检查２.水中细菌的检查３.皮肤消毒试验４.飞沫中细菌的检查二、外界因素对细菌的影响１.高压蒸汽灭菌法２.紫外线杀菌试验３.药物

2、敏感试验一、细菌的分布检查了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。材料普通琼脂平板血琼脂平板MH琼脂平板３７℃温箱无菌棉签等普通琼脂平板血琼脂平板空气中细菌的检查（示教）左边培养皿菌落是未被过滤空气中的细菌，右边是经过滤空气中留有的少量细菌水中细菌的检查（示教）取水样1ml注入无菌空平皿内加15mL已融化并冷却至约45℃的培养基混匀倒置于３７℃温箱培养18-２４h后观察结果1.分区标记2.接种3.培养皮肤细菌的检查：空白对照消毒后消毒前常用的皮肤消

3、毒剂飞沫中细菌的检查用咳碟法将咽喉部细菌接种于血平板二、外界因素对细菌的影响当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。1.高压蒸汽灭菌法（示教）原理：利用密闭的金属锅，密闭加热使锅内蒸汽压力增大，温度随之升高，杀菌力增强。高压蒸汽灭菌器手提式高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器构造：高压蒸汽灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上方或前方有金属厚盖。盖旁附有螺旋，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽压力升高，其温度亦相应的增高。1.加水至外筒内，被灭

4、菌物品放入内筒。2.盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。3.加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时(103.4kPa,121.3℃)，保持压力和温度维持15～30min。4.待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突然打开排气阀门，以免瓶内液体等冲出外溢。使用方法用途凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、传染性污物等都可应用本法灭菌。2、紫外线杀菌试验原理：通过紫外线的照射，破

5、坏及改变微生物的DNA结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的。优点简单便捷、广谱高效、无二次污染、便于治理和实现自动化等优点。缺点穿透能力弱特点材料普通琼脂平板18-24h细菌培养物紫外线灯等方法细菌接种于普通琼脂平板上打开皿盖，放置于紫外灯下约30cm处，用盖子盖住半边做对照，照射半小时后盖好盖子。培养药物敏感试验目前临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ）原理：将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，

6、纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生素的浓度呈对数减少,在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。材料菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）试剂：各种抗菌药物纸片（PEN、GEN、STR、CHL)方法用灭菌棉试蘸取试验菌涂抹在MH培养基表面，要均匀涂抹3次，室温下待干燥以无菌镊子(烧灼灭菌，注意镊子要冷却）取各抗生素纸片

7、贴于表面培养各纸片中心距>24mm,纸片距平板边缘应>15mmPENGENSTRCHL结果判断用毫米尺量取抑菌圈直径，参考试验指导表3-6的标准判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。材料分配分组两人一组菌种金葡菌、大肠杆菌各一支培养基2块普通平板/组（皮肤细菌的检查、紫外线杀菌试验）2块MH平板/组（药物敏感试验）1块血平板/组（咽喉部细菌的检查）抗菌药物耐药中介敏感青霉素≤28－≥29庆大霉素≤1213-14≥15链霉素≤1112-14≥15氯霉素≤1213-17≥18纸片法药敏试验结

8、果解释