蛙心灌流实验报告.docx

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1、实验二离体蛙心灌流实验专业：学号：一、实验目的1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。2.观察理化因素对蛙心活动的影响。二、实验原理蛙心的灌流：蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新代，心脏仍能有节律的自动收缩、舒，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏膜液体的直接渗透而得。心肌：受体受体激动剂效应Bi肾上腺素去甲肾上腺素心率增快、房室传导加速、心肌收缩力加强。M乙酰胆碱心率减慢、房室传导减慢、心肌收缩力减弱。1.任氏液：正常对照含有NaCI、CaCb、KCI、NaH2PO4、Na2HPO4和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。2.0.65%NaCI灌

2、流：0_65%NaCJ®流细胞WCa24^心肌细胞动作电k期间C/十内流HJ心肌细胞胞浆0已"浓度卄心肌收缩力卄3.2%CaCb灌流:细胞外裁cE浓度显著升髙膜内-外C/浓度梯度增大一~一一慢反应细胞4期牛工作细胞动作电位期间C』内流怦自动去极速度1肌浆cf浓度料1肌浆cf浓度持续升高自律性*AC*与肌钙■■蛋白结合数量啊Ca与肌钙蛋白心率J■只结合不解高心肌收缩力忖心肌持续收睹4.1%KCl灌流:细斛液K理般度牖T

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4、■外丘浓度梯度减小群息电位绝对值减小至-55mVNa通道失活心肌细胞兴奋性丧失*心脏停搏于舒张状态5.1:10000E灌流肾上腺素(E)心肌细胞膜厉受体结合C/与肌钙蛋白亲细胞膜对C尹通透性齐和力*II；1■-一肌浆网摄C代速度个4期自动去扱化速度卒肌浆网对AC汙逋透性I复极期肌浆匚£浓度降低速度自律性牛心肌舒张丰心率宀动作电位期忖间U弦内流1*心肌收缩力存6.1:10000Ach灌流乙酰胆M(Ach)心肌细胞膜M受体结合抑制钙通道对Oi鈿通逶性扌/动作电冷.期间：产內流柴心肌收缩力井细胞膜对K*通透性丰窦房结细胞最大复极电位绝对值增大.4期K亠外流增加Ix自律性*I心率*7.心得安

5、B受体阻断剂，抑制肾上腺素与B受体结合，使E不能发挥作用。8.阿托品M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力三、实验器材离体蛙心任氏液、I%KCI溶液、2%CaCl2溶液、0.65%NaCI溶液、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品四、实验步骤1.离子试剂任氏液清洗任氏液清洗任氏剂k0.65%NaCI2%CaCl21%KCIk任氏液2.药物试剂任氏液清洗Ach任氏液清洗任氏液清洗E心得安+E—阿托品+Ach任氏液五、结果与分析分析：细胞外液中Ca2+浓度降低，2期Ca2+流减少，胞浆中Ca2+减少，心肌收缩力降低。图20.65%NaCI

6、灌流脉搏曲线心率：38次/min最大收缩力：3.5g最小收缩力：1.1g图32%CaCl2灌流脉搏曲线分析：心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。心肌肌浆网不发达，储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中Na+与CaF+有竞争性抑制，细胞外液Ca2+浓度升高，细胞兴奋时流Ca2+增加，心肌收缩力增强。慢反应细胞4期去极速度加快，心率增快。图5肾上腺素灌流脉搏曲线分析：肾上腺素与心肌细胞膜上的沏受体结合，心肌细胞和肌浆网膜ca2通透性增强，肌浆中cf浓度升高，心肌收缩力增强。而且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离子亲和力下降，肌钙蛋白对钙离子的释放增强，肌浆网膜摄取钙离子

7、的速度加快，钠-钙离子的交换增加，复极期向细胞外排出钙离子增多，心肌舒速度增快，整个舒过程明显加强。分析：心得安是B1受体阻断剂，能够抑制肾上腺素与B1受体结合，使E不能发挥作用，因此心率及心肌收缩力保持不变。分析：乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合，心肌细胞膜K通道的通透性增强,促进K+外流，动作电位期间Cf流减少，心肌收缩力降低。同时乙酰胆碱可直接抑制Cf通道，导致Ccf+流减少，心肌收缩力降低。心率：34次/min最大收缩力：2.5g最小收缩力：l.lg图8阿托品+Ach灌流脉搏曲线分析：阿托品是M受体阻断剂，能够抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力，因此心率及心肌

8、收缩力保持不变。六、讨论1.为何常用离体蛙心，而不常用离体哺乳类动物心脏做心脏灌流实验？蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，它的离体组织、器官的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源丰富且价格低廉。离体蛙心不需要恒温和特殊的供氧设备，因此常被选作心脏灌流实验。而哺乳类心脏生活条件要求高，离体心脏灌流需要恒温环境，恒压或恒流灌流、供氧。实验影响因素多、设备多，心脏离体后存活时间较短。因此一般学生实验较少用哺乳类动物心脏做离体心脏灌流实验。